プルキンエ細胞およびバーグマングリア特異的Sept7欠損マウスの解析

浦肯野细胞和伯格曼胶质细胞特异性 Sept7 缺陷小鼠的分析

基本信息

批准号：
20022022
负责人：
木下専
金额：
$ 5.12万
依托单位：
Nagoya University (2009)Kyoto University (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

Sept7(exon3)floxedマウスを作製し、L7Cre、S100b-CreおよびDAT-Creドライバーマウスと交配した。組み換えはPCRでは検出されるものの、組織染色ではSept7蛋白質欠損細胞は検出されなかったことから、両アレル同時には欠失しない程度に組み換え効率が低いと推測された。一方、Tリンパ球特異的なCd4-Creでは組み換えが起こって期待される形質が発現したことから(投稿準備中)、Sept7(exon3)floxedアレルの組み換え効率が分化状態ないし細胞系譜による影響を受けやすいことがわかった。対策として、1 hitでnullが得られるようdel/floxedマウスの作製を開始した。また、支援班の崎村教授グループの協力を得て(GluR2-Creマウスとの交配を試みるとともに、組み換え効率の改善を期待してSept7(exon4)floxedマウスを作製した。関連研究として、大脳皮質ニューロンにおけるSept7RNAiが軸索・樹状突起の伸長を阻害することを示した。これは線虫のセプチン変異体unc-59/-61で報告された神経突起伸長・分岐異常と符合する。このメカニズムが既知のセプチン機能(微小管、アクチン、tSNAREの機能修飾・安定化)で説明できるか否かを検証中である。また、低分子量G蛋白質Cdc42はエフェクター蛋白質ファミリーCdc42ep1-/1Borg1-5を介してセプチン系を制御する(Nat Cell Biol 2001)。このパスウェイの生理的意義を検証するため、バーグマングリアと海馬歯状回ニューロンで選択的に発現するCdc42ep/Borgに着目してノックアウトマウスを作製し、解析中である。以上、本研究で作製した研究リソースが、脳研究に貢献し、さらに、がん、不妊、肝線維化、感染防御、免疫系の研究にも役立つ得ることがわかった。

生成 Sept7（外显子 3）floxed 小鼠并与 L7Cre、S100b-Cre 和 DAT-Cre 驱动小鼠杂交。尽管通过 PCR 检测到重组，但通过组织染色未检测到 Sept7 蛋白缺陷细胞，这表明重组效率足够低，以至于两个等位基因没有同时删除。另一方面，重组发生在T淋巴细胞特异性Cd4-Cre中，并表达了预期的性状（准备提交），表明Sept7（外显子3）floxed等位基因的重组效率受到分化状态或细胞谱系的影响我发现这很容易。作为一种对策，我们开始创建一个 del/floxed 鼠标，一次点击就会产生空结果。此外，在支持团队中Sakimura教授团队的合作下，我们尝试杂交培育GluR2-Cre小鼠并创建Sept7（外显子4）floxed小鼠，希望提高重组效率，我们发现Sept7 RNAi抑制轴突和树突伸长。线虫 septin 突变体 unc。这与 -59/-61 中报道的异常神经突生长和分支相匹配，我们目前正在研究这种机制是否可以通过已知的 septin 功能（微管、肌动蛋白和 tSNARE 的功能修饰和稳定）来解释。分子量 G 蛋白 Cdc42 通过效应蛋白家族 Cdc42ep1-/1Borg1-5 (Nat为了验证该通路的生理意义，我们已经生成并正在分析Cdc42ep/Borg，它在伯格曼胶质细胞和海马齿状回神经元中选择性表达，发现本研究中创建的研究资源不仅会做出贡献。对大脑研究来说，也可用于癌症、不孕不育、肝纤维化、感染防御和免疫系统的研究。

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Loss of Sept4 exacerbates liver fibrosis through the dysregulation of hepatic stellate cells

DOI：
10.1016/j.jhep.2008.05.026
发表时间：
2008-11-01
期刊：
JOURNAL OF HEPATOLOGY
影响因子：
25.7
作者：
Iwaisako, Keiko;Hatano, Etsuro;Kinoshita, Makoto
通讯作者：
Kinoshita, Makoto

Amoeboid T lymphocytes require the septin cytoskeleton for cortical integrity and persistent motility.

DOI：
10.1038/ncb1808
发表时间：
2009-01
期刊：
NATURE CELL BIOLOGY
影响因子：
21.3
作者：
Tooley, Aaron J.;Gilden, Julia;Jacobelli, Jordan;Beemiller, Peter;Trimble, William S.;Kinoshita, Makoto;Krummel, Matthew F.
通讯作者：
Krummel, Matthew F.

Metastability and function of cortical septin polymers. Membrane dynamics and cytoskeleton

皮质脓蛋白聚合物的亚稳定性和功能。