新規無針注入器によるDNA・蛋白質の皮内投与によるワクチン効果と遺伝子治療増強

使用新型无针注射器皮内注射 DNA/蛋白质，增强疫苗功效和基因治疗

基本信息

批准号：
22K12772
负责人：
善本隆之
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度は、新規無針注射器Pyro-drive jet injector（PJI）を用いて、モデル抗原として鶏卵白アルブミン（OVA）の発現プラスミドDNA投与による抗腫瘍ワクチン効果の増強とその作用機序について検討を行った。① 抗腫瘍ワクチン効果：OVA反応性のT細胞受容体のトランスジェニックマウスOT-IおよびOT-IIマウス由来のそれぞれCD8+T細胞とCD4+T細胞を前日に移入したマウスに、OVAプラスミドpOVAをPJIおよび通常の有針注射器を用いて皮内投与を行い、1週間後所属リンパ節細胞を蛍光標識したMHCクラスI/IIのOVA peptideテトラマーと抗CD4/抗CD8抗体で染色しFACS解析した。その結果、有針注射器に比べPJIによる投与により、より強い抗原特異的CD8+T細胞の誘導と、IFN-gおよびIL-4産生、抗原再刺激による細胞増殖誘導がされた。さらに、抗原特異的細胞傷害性T細胞の誘導によるin vivoのKilling活性や、抗原特異的抗体産生も増強された。次に、OVA-E.G7腫瘍を用いて、有針注射器に比べPJIにより、より強いCD8+T細胞依存性の腫瘍増殖の抑制効果や、予防効果も見られた。ヒトに通常用いられる水酸化アルミニウムAlumでエマルジョンを作ったOVA蛋白質投与と比較しても、同等かより強い抗原特異的CD8+T細胞の誘導と抗腫瘍のワクチン効果が増強された。② 作用機序の解明：その作用機序として、GFP発現ベクターを用いて有針注射器およびPJIを用いて皮内投与し、皮膚局所でのFACS解析により、CD11c+樹状細胞に、GFPによるより強い蛍光強度が増強された。さらに、皮膚局所より細胞溶解液を調製し、ウエスタンブロット解析を行うと、PJIにより投与3日頃をピークに、皮膚局所でのOVAの蛋白質レベルでのより強い発現増強が見られた。

2022财年，我们将使用新型无针注射器Pyro-drive喷射注射器（PJI），以表达母鸡卵清蛋白（OVA）的质粒DNA作为模型抗原，研究抗肿瘤疫苗功效的增强及其作用机制塔。 ①抗肿瘤疫苗作用：于前一天将OVA质粒pOVA注射到转染OVA反应性T细胞受体转基因小鼠OT-I和OT-II小鼠的CD8+T细胞和CD4+T细胞的小鼠体内。使用 PJI 和普通针头注射器皮内注射 I/II OVA，并在 1 周后荧光标记区域淋巴结细胞。将细胞用肽四聚体和抗CD4/抗CD8抗体染色并通过FACS进行分析。结果，与使用针头注射器给药相比，使用 PJI 给药可诱导更强的抗原特异性 CD8+ T 细胞、IFN-g 和 IL-4 产生，以及通过抗原再刺激的细胞增殖。此外，通过诱导抗原特异性细胞毒性T细胞和抗原特异性抗体产生而产生的体内杀伤活性也得到增强。接下来，使用 OVA-E.G7 肿瘤，PJI 对 CD8+ T 细胞依赖性肿瘤生长具有更强的抑制作用，并且比使用针头注射器具有更强的预防作用。与施用人类常用的氢氧化铝乳液中的OVA蛋白相比，抗原特异性CD8+T细胞的诱导和抗肿瘤疫苗效果相同或更强。 ② 阐明作用机制：其作用机制是使用针头注射器和 PJI 皮内注射 GFP 表达载体，皮肤局部 FACS 分析表明该药物对 CD11c+ 树突状细胞的作用比 GFP 更强荧光强度增强。此外，当从皮肤中制备细胞裂解物并进行蛋白质印迹分析时，在PJI后在皮肤中观察到OVA在蛋白质水平上的表达增强，在施用后3天左右达到峰值。