上皮細胞の極性分泌経路の起源-TGN-細胞表面間小胞輸送の分子機構-

上皮细胞极性分泌途径的起源 - TGN的分子机制 - 细胞表面囊泡转运 -

基本信息

批准号：
08680772
负责人：
吉森保
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者が見いだした、繊維芽細胞における上皮細胞に類似したTGN-細胞膜間選別輸送について、研究計画に基づき解析を行い以下の成果を得た。1)これまでの解析に用いてきたBHKとCHO細胞以外にも、イヌの繊維芽細胞由来の培養細胞であるA72でもやはり上皮細胞に良く似た選別があり、先端面類似輸送と側底面類似輸送の2種類の経路が存在することを見いだした。2)当初の研究では、インフルエンザウイルス凝集素とセミリキ森林ウイルスE蛋白質を輸送のマーカーとして追跡してきた。しかしこれらのマーカー蛋白質は外来性であるので、実際に繊維芽細胞が自己の蛋白質を選別しそれぞれの輸送経路に乗せているのかを明らかにするため、内在性の細胞膜蛋白質及び分泌蛋白質を解析した。BHK細胞を^<35>S-メチオニンでパルス標識し、20℃で被輸送蛋白質をTGNに蓄積した後、フッ化アルミニウム存在乃至非存在下で37℃で細胞膜へ輸送させた。フッ化アルミニウムは側底面類似輸送を阻害するが、先端面類似輸送には影響しない。培養液中に現れた分泌蛋白質と、細胞表面のビオチン化で検出される細胞膜蛋白質を、2次元電気泳動とオートラディオグラフィーで解析したところ、全細胞膜蛋白質のうちの5〜10スポットと全分泌蛋白質の多くがフッ化アルミニウムに阻害されずに輸送されていた。従って繊維芽細胞は、内在性蛋白質についても選別を行い別々の経路で輸送していること、細胞膜蛋白質と分泌蛋白質では主に利用する経路が違うことが判明した。3)フッ化アルミニウム以外の薬剤について、この2種類の輸送経路に及ぼす影響を検討した。破傷風毒素とコレラ毒素はどちらにも影響を与えなかった。ブレフェルディンAは両方を阻害したが、先端面類似輸送の阻害が50%であるのに対して、側底面類似輸送はほぼ100%阻害した。分泌経路のオルガネラ内腔を酸性化しているV-ATPaseの阻害剤であるブフィロマイシンとコンカナマイシンはどちらも側底面類似輸送のみを阻害した。

根据研究代表发现的成纤维细胞细胞中的上皮细胞类似于TGN细胞膜分选转运的研究计划进行分析。 1）除了用于分析的BHK和CHO细胞外，A72是从狗的成纤维细胞中得出的培养细胞，具有类似于上皮细胞的分类，我发现了类似的运输和侧面两种运输。 2）在最初的研究中，流感病毒凝聚力和半脱落森林病毒E蛋白已被追踪为转运标记。但是，由于这些标记蛋白是门诊病人，我们分析了内部细胞膜蛋白和分泌蛋白，以阐明成纤维细胞是否实际分类自己的蛋白质并将其放在每个传输途径上。 BHK细胞是脉冲符号，脉冲标志在20°C下在TGN中累积的转运蛋白，并在37°C下在37°C的37°C下运输到细胞膜。氟化铝阻碍了侧面的底部相似，但不会影响尖端样的运输。分析在培养物中出现的分泌蛋白和细胞膜蛋白在细胞表面检测到的，具有两个维度的电气游泳和自动绘画，5至10个斑点，所有细胞膜蛋白的分泌蛋白和所有分泌的蛋白质的所有分泌蛋白在不阻碍铝的情况下运输。因此，发现纤维芽也通过在内部蛋白质中进行排序并在单独的路线上运输，并且主要用于细胞膜蛋白和分泌蛋白的路线不同。 3）检查了氟化物以外的其他药物对这两种类型的运输路线的影响。破伤风毒素和胆碱毒素都没有对其作用。 Breefeldin A都抑制了两者，但抑制了侧面侧面侧面侧面的侧面的侧面。 v- ATPase抑制剂（一种在分泌途径的有机腔中酸化的）抑制剂抑制剂抑制剂霉素抑制了霉菌素和丙霉素。