ヒト抗体ファージ提示ライブラリの構築及びOS免疫測定原理に基づく診断用チップの開発

基于OS免疫分析原理的人抗体噬菌体展示库构建及诊断芯片开发

基本信息

批准号：
09F09090
负责人：
上田宏
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09F09090/
关键词：
生物・生体工学分析科学蛋白質

项目摘要

1)ファージライブラリからの甲状腺ホルモンの高感度検出系の構築血液中の甲状腺ホルモン(Thyroxine,T4)量は甲状腺疾患の診断マーカーとして重要であり、その簡便迅速な測定系の確立は最近の放射能不安解消の観点からも急務といえる。我々は最近,董研究員の開発したpDongシステムを用いて免疫マウスよりT4の高感度なOS-ELISAに適した抗体を選択することに成功した。これは,ハイブリドーマを介さずOS-IAに適した抗体を選択した初めての例である。さらに,ここで得られた抗体をマイクロ流路検出系に用いて,数マイクロリットルのサンプルより20分以内で血清中のT4濃度を測定することに成功した。2)高病原性トリインフルエンザウイルス抗体的開発高病原性(H5N1)トリインフルエンザウィルスは,特に迅速高感度な診断を要するターゲットである。そこで東京都臨床医学研究所の芝崎博士らと共同でOS-IAでこのウィルスを迅速高感度に検出するための抗体開発を行った。この際ウイルスの表面蛋白質ヘマグルチニン(H5-HA)ペプチドで免疫したマウス由来抗体ライブリを作製し,ここから,このペプチドに特異的に結合する抗体をパニングにより多数取得することができた。さらにこれらの抗体を用いて,HA蛋白質ペプチドの高感度なOS-ELISA実施にも成功した。さらに,GFP-HA融合蛋白質を発現するモデル感染細胞染色の実験で,これらの抗体が細胞内のHAとも結合することが確認された。現在実際の感染細胞でのウイルス粒子の検出をImmunoPCR法との組み合わせを含めて検討している。3)この他,抗原結合によりその酵素活性が促進される抗体酵素融合タンパク質の作製,多数の低分子認識抗体遺伝子のクローニングなど,多くの仕事に関わりそれぞれにつき成果をあげることができた。

1）从噬菌体库中构建高度敏感的检测系统，用于血液中甲状腺激素（T4）的数量作为甲状腺疾病的诊断标志物很重要，并且从宽松的放射性放射性焦虑的角度来建立一个简单而快速的测量系统是必不可少的。最近，我们使用研究人员Dong开发的PDONG系统，成功地选择了适用于T4敏感OS-ELISA的抗体。这是选择适合OS-IA的抗体而无需使用杂交瘤的第一个示例。此外，此处获得的抗体在微通道检测系统中使用，以成功测量几种样品微粒液的20分钟内血清中的T4浓度。 2）开发高度致病性的禽流感病毒抗体高致病性（H5N1）禽流感病毒是尤其是需要快速和敏感诊断的靶标。因此，我们与东京临床医学研究所的shibazaki博士和其他人合作，开发了使用OS-IA快速，高度敏感地检测该病毒的抗体。此时，制备了该病毒的血凝素（H5-Ha）肽免疫的小鼠衍生的抗体库，从中制备了许多特异性结合与该肽的抗体。此外，使用这些抗体，我们还成功地对HA蛋白肽进行了高度敏感的OS-ELISA。此外，表达GFP-HA融合蛋白的模型感染细胞染色的实验证实了这些抗体也与细胞内HA结合。目前，我们正在考虑在实际感染细胞中检测病毒颗粒，包括与免疫方法结合使用。 3）此外，我们在许多工作中都取得了结果，例如抗体融合蛋白的产生，这些蛋白通过抗原结合促进其酶活性，以及许多小分子识别抗体基因的克隆。