リガンド依存的に会合制御が可能なセンサーペプチドの創製

创建可以以配体依赖性方式控制缔合的传感器肽

基本信息

批准号：
14655303
负责人：
上田宏
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.繊維状ファージを用いた新規な蛋白質間相互作用測定系の改良ファージに二種類の蛋白質の片方のみを提示し,片方を分泌型蛋白質として産生させ両者の間の相互作用を測定することができる新規蛋白質間相互作用測定系split Fv (spFv)システムを構築した.これを抗体の可変領域を構成する二つのドメイン(H鎖可変領域VHおよびL鎖可変領域VL)間の相互作用測定に応用したところ,確かに抗原添加に伴う相互作用変化を測定でき,またファージ産生ホストとしてアンバーサプレッサー変異株を用いることで,二つのドメインVH, VL両者を同時に提示し,可変領域としての抗原結合能を評価することも出来た.しかしこれをライブラリからの抗原結合クローンの濃縮に用いた場合,しばしば発現産物の細胞毒性によるとみられる遺伝子の欠落が起こったため,ベクター上にコードされる遺伝子の上流および下流に2個のグルタミンパーメアーゼ由来ターミネーターを挿入したところ,遺伝子の安定性に顕著な改善が見られた.よって以後このベクターを用いてライブラリからの選択をおこなった.2.SpFvシステムを用いた,抗体可変領域の安定性を決める残基の同定リガンド依存的に会合制御が可能なペプチドのモデルとして,抗原依存的に会合制御が可能なリゾチーム抗体HyHEL-10のVH/VL界面に存在するFR2領域に着目し,この部分のアミノ酸配列のうち抗原依存的な会合を示さない抗体D1.3において異なる計13残基をHyHEL-10型およびD1.3型にしたライブラリを作製しそのVH/VL相互作用および抗原結合能への影響を考察した.この結果,VH/VLの抗原依存的結合に決定的な役割を果たす残基(H39)が同定され,また抗原結合能とVH/VL相互作用との関係について包括的な知見を得ることができた(増田ら,化学工学会第68年会発表予定,投稿準備中).

1。使用丝状噬菌体测量蛋白质相互作用的改进的噬菌体系统用于创建一种新型的拆分FV（SPFV）系统，这是一种新型的解释蛋白相互作用测量系统，可用于测量两个域之间的相互作用（H链可变区域VH和L链可变区域VL），该系统使用抗体的可变区域和真实的抗体区域相关，并与抗体相关，并与抗体相关，并与抗体变化相关。抑制突变菌株作为噬菌体生产宿主，两个域VH和VH是两个域。同时介绍了两个VL，并且可以评估抗原结合能力作为可变区域。但是，当将其用于富集图书馆的抗原结合克隆时，通常认为该基因是由于表达产物的细胞毒性引起的，当两个谷氨酰胺渗透酶衍生的终结剂被插入上游和下游的基因上的载体上，该基因在载体上编码了显着改善，该基因的稳定性是在基因的稳定性中的显着改善。因此，该向量用于从库中选择2。使用SPFV系统，一种可以以配体依赖性方式控制的肽模型。我们专注于在溶组织抗体Hyhel-10的VH/VL界面上存在的FR2区域，该溶液抗体-10可以以抗原依赖性方式链接，并创建了一个库中的13个抗体D1.3中的13个不同残基D1.3，该抗体中的抗原依赖性依赖于抗原依赖性的关联，并表现为Hyhel-10和dig-dig and dig and dig and velen and velen and vellen and vellen and vellen and veling nisting nisting nisting-indist instiment instiment instiment效应。结果，确定了在VH/VL的抗原依赖性结合中起关键作用的残基（H39），并且获得了有关抗原结合能力与VH/VL相互作用之间关系的全面知识（Masuda等人（Masuda等人），计划在当前在化学工程的第68届会议上进行介绍，目前是在制备中）。