白血球特異的パキシリン様蛋白質リューパキシンによる造血系腫瘍細胞の運動制御

白细胞特异性桩蛋白样蛋白 leupaxin 对造血肿瘤细胞运动的控制

基本信息

批准号：
12215093
负责人：
田中稔之
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

接着班に濃縮して存在する多機能性アダプター分子・パキシリンと相同のドメイン構造をもち、白血球特異的に発現するleupaxinの造血系腫瘍細胞の接着と運動制御における機能的な役割を明らかにすることを目的として以下の解析を行った。【1】leupaxinの細胞内局在の解析leupaxinは、パキシリンと類似のドメイン構造を示すことから、造血系細胞の接着レセプターの裏打ち構造の構築に関与することが予想された。EGFP融合蛋白質を用いて造血系腫瘍細胞における細胞内分布を解析した結果、leupaxinはアクチン繊維に富む細胞表層部に選択的に分布することが明らかになった。【2】leupaxinと会合する分子の検索パキシリンはチロシンキナーゼFAKとの会合を通じて細胞の接着および運動の制御に重要な役割はたすと考えられている。マウス胸腺腫細胞BW5147を用いて、leupaxinと会合する分子を免疫沈降法により検索した結果、leupaxinはFAKと相同性の高いチロシンキナーゼPyk2と会合することが認められた。【3】leupaxinのシグナル伝達への関与leupaxinとEGFPの融合蛋白質を293T細胞に一過性に過剰発現させ、固相化したフィブロネクチンへの接着依存性に誘導されるパキシリンのチロシンリン酸化に対する影響を解析した。その結果、leupaxinを過剰発現させた293T細胞では、フィブロネクチンへの接着によるインテグリン依存性のパキシリンのチロシンリン酸化が対照群に比して減弱していることが示された。以上の結果より、leupaxinはパキシリンのチロシンリン酸化を介するシグナル伝達に対して抑制的に作用することが示唆された。

为了阐明具有与桩蛋白同源的结构域并在白细胞中特异性表达的leupaxin在造血肿瘤细胞的粘附和运动控制中的功能作用，对集中在粘附簇中的多功能接头分子进行了以下分析。为了目的。 [1] leupaxin的细胞内定位分析由于leupaxin显示出与paxillin相似的结构域，因此预测其参与造血细胞粘附受体的衬里结构的构建。使用EGFP融合蛋白对造血肿瘤细胞的细胞内分布进行分析表明，leupaxin选择性地分布在富含肌动蛋白纤维的细胞表层。 [2] 寻找与 leupaxin 相关的分子 Paxillin 被认为通过与酪氨酸激酶 FAK 相关，在控制细胞粘附和运动方面发挥着重要作用。使用小鼠胸腺瘤细胞 BW5147 通过免疫沉淀寻找与 leupaxin 相关的分子，结果发现 leupaxin 与酪氨酸激酶 Pyk2 相关，而酪氨酸激酶 Pyk2 与 FAK 高度同源。 [3] leupaxin 参与信号转导 leupaxin 和 EGFP 的融合蛋白在 293T 细胞中瞬时过表达，并研究了对固定纤连蛋白粘附诱导的桩蛋白酪氨酸磷酸化的影响。结果显示，在过表达亮帕克辛的293T细胞中，与对照组相比，由于与纤连蛋白粘附而导致的整合素依赖性桩蛋白酪氨酸磷酸化减弱。上述结果表明，leupaxin对桩蛋白酪氨酸磷酸化介导的信号转导具有抑制作用。