がん細胞の接着が誘発する血管内皮細胞間隙の開裂に関わるシグナル伝達分子の探索

寻找参与癌细胞粘附诱导的血管内皮细胞间隙裂解的信号分子

基本信息

批准号：
10152237
负责人：
田中稔之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

【1】キメラCD44を用いた新しい接着シグナルの検出系の確立とCD44の機能的エピトープの解析:CD44の細胞内領域にFasのdeath domainを含む細胞内領域を連結したキメラ分子をCD44を発現しないAKR-1細胞に遺伝子導入し、CD44の接着シグナルを細胞死へ変換する新しい検出系を確立した。この検出系とCD44の異なるエピトープに対する単クローン抗体(mAb)を用いて、CD44のシグナル形成に関与する細胞外領域の特定を試みた。その結果、LyS49を含むCD44のヒアルロン酸結合に関連するエピトープを認識するmAbおよびPro108/Thr113を含むエピトープに対するmAbにアポトーシス誘導活性が認められた。【2】血管内皮細胞に発現しtransmigrationを制御する信号伝達分子の検索:リンパ節の高内皮細静脈(HEV)はその表面に接着した細胞を高率にtransmigrateさせる特徴をもつ。そこで、精製したHEVから3′末端特異的cDNAライブラリを作製し、各々約1,500クローンの塩基配列(gene、signature:GS)の決定とGSの出現頻度解析を通じてHEVの「遺伝子発現プロフィル」を得た。また、CD31^+内皮細胞やリンパ球を含む他のライブラリの解析リストとの比較およびデータベース検索を通じてHEV特異的遺伝子の探索を試みた。その結果、HEVにはendoglinやCD34などの既知の内皮細胞マーカーに加え、炎症反応に関連する遺伝子などの発現が認めれられた。またHEVに選択的に検出された既知遺伝子のうち、出現頻度の高いmac25/TAFについてin situハイブリダイゼーションを行ったところ、HEVに選択的にシグナルが検出された。

[1]利用嵌合CD44建立新的粘附信号检测系统并分析CD44的功能表位：一种嵌合分子，其中CD44的胞内区域与含有Fas死亡结构域的胞内区域连接，Fas不表达CD44我们将一个基因引入AKR-1细胞中，并建立了一个新的检测系统，将CD44粘附信号转化为细胞死亡。使用该检测系统和针对 CD44 不同表位的单克隆抗体 (mAb)，我们尝试鉴定参与 CD44 信号形成的细胞外区域。结果，在识别与 CD44 与透明质酸结合相关的表位（包括 LyS49）的 mAb 和针对表位（包括 Pro108/Thr113）的 mAb 中观察到了细胞凋亡诱导活性。 [2] 寻找在血管内皮细胞中表达并控制迁移的信号转导分子：淋巴结中的高内皮小静脉（HEV）的特点是附着在其表面的细胞迁移率高。因此，我们从纯化的HEV中创建了3'端特异性cDNA文库，确定了每个大约1,500个克隆的核苷酸序列（基因，签名：GS），并通过分析GS的频率获得了HEV的“基因表达谱” .我们还尝试通过与其他含有CD31^+内皮细胞和淋巴细胞的文库的分析列表比较以及数据库搜索来搜索HEV特异性基因。结果，除了已知的内皮细胞标志物如内皮糖蛋白和CD34之外，在HEV中还观察到与炎症反应相关的基因的表达。此外，当对作为在HEV中选择性检测到的已知基因的mac25/TAF进行原位杂交时，在HEV中选择性地检测到信号。