ILー2レセプタ-の構造と機能の解析

IL-2受体结构与功能分析

基本信息

批准号：
02152137
负责人：
田中稔之
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

現在ILー2レセプタ-には少なくとも2種のサブユニット(α鎖、β鎖)の存在が知られている。本研究ではILー2レセプタ-の構造と機能の解明を目的とし以下の解析を行った。<1.ILー2レセプタ-複合体の解析:>___ー遺伝子導入によりヒトT細胞に発現させたヒトβ鎖は中親和性ILー2結合を示すが、線維芽細胞に発現させたβ鎖には期待されるILー2結合が認められない。しかし線維芽細胞にα鎖とβ鎖を同時に発現させると、高親和性レセプタ-が再構成された。これらの結果は、高親和性ILー2結合にはα鎖とβ鎖で十分であること、および中親和性レセプタ-にはβ鎖とリンパ系細胞に存在する他の細胞成分の相互作用が必要なことを示している。また新たに作製した抗マウスβ鎖抗体を用いた解析の結果、マウスβ鎖も中親和性レセプタ-として機能するためには他の細胞成分を必要とするがヒトβ鎖とはILー2結合親和性の調節機構が異なることが示唆された。<2.β鎖を介するILー2シグナル伝達の解析:>___ーヒトβ鎖を、α鎖・β鎖をともに発現しないILー6依存性マウスB細胞株に遺伝子導入した。得られた細胞株は中親和性ILー2レセプタ-の発現とともに、ILー2依存性の細胞増殖を示した。この結果は、β鎖がα鎖の非存在下にILー2の増殖シグナルを細胞内に伝達し得ることを示す。またILー2とILー6のレセプタ-結合以降の刺激伝達経路は少なくとも一部が共通である可能性が示された。<3.可溶性β鎖の作製とその意義の検討:>___ー細胞外領域のみからなるヒトβ鎖を遺伝子工学的に作製した。得られた可溶性β鎖の分子量は37KdでcDNAから計算される値と一致し、ILー2に対してきわめて弱い結合親和性のみを示した。また今回作製した可溶性β鎖にはILー2反応の阻害活性は見いだされなかった。

目前，已知IL-2受体至少具有两种类型的亚基（α链和β链）。在本研究中，我们进行了以下分析，旨在阐明 IL-2 受体的结构和功能。 <1. IL-2 受体复合物分析：>___-通过基因转移在人 T 细胞中表达的人 β 链显示出中等亲和力的 IL-2 结合，但在成纤维细胞中表达的 β 链未观察到预期的 IL-2 结合。链。然而，当成纤维细胞同时表达α链和β链时，高亲和力受体被重建。这些结果表明α和β链对于高亲和力IL-2结合来说是足够的，并且β链与淋巴细胞中存在的其他细胞成分的相互作用对于中等亲和力受体是必要的。此外，使用新创建的抗小鼠β链抗体进行的分析表明，小鼠β链还需要其他细胞成分才能发挥中等亲和力受体的作用，但人β链不与IL-2结合。这些结果表明。亲和力的调节机制不同。 <2.通过β链分析IL-2信号转导：>___-将人β链转染至不表达α链或β链的IL-6依赖性小鼠B细胞系中。获得的细胞系表达中等亲和力的IL-2受体并表现出IL-2依赖性细胞增殖。该结果表明，在α链不存在的情况下，β链可以将IL-2增殖信号传递到细胞中。还表明IL-2和IL-6在与受体结合后可能至少具有部分相同的刺激传递途径。 <3.可溶性β链的制备及其意义的研究：>___--通过基因工程创造了仅由细胞外区域组成的人类β链。所得可溶性β链的分子量为37Kd，与cDNA计算值一致，且与IL-2的结合力极弱。此外，本次制备的可溶性β链未发现对IL-2反应的抑制活性。