IL2レセプターβ鎖トランスジェニックマウスを用いたIL2特異的シグナルの解析
使用 IL2 受体 β 链转基因小鼠分析 IL2 特异性信号
基本信息
- 批准号:07770241
- 负责人:
- 金额:$ 0.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1995
- 资助国家:日本
- 起止时间:1995 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
IL-2のシグナル伝達に選択的に共役する二次メッセンジャー系および標的遺伝子の同定を目的として,以下の実験を行った.【1】IL-2刺激により活性化する細胞内シグナル伝達遺伝子の解析種々の細胞をIL-2刺激後可溶化し,抗リン酸化チロシン抗体を用いたウエスタン法により,IL-2依存性にチロシンリン酸化をうける細胞内基質を探索した.その結果,ヒトNK様細胞YTSおよびIL-2レセプターβ鎖(IL-2Rβ)を導入したBAF/B03細胞では,IL-2刺激依存的にpp100が共通なリン酸化基質として検出されたが,これまでのところIL-2Rβトランスジェニックマウス由来細胞で同様な結果は得られていない.【2】IL-2刺激に応答する標的遺伝子単離の試みIL-2刺激に対する標的遺伝子を同定するためには,IL-2刺激前後の遺伝子発現の変化を高感度で検出できる実験系が必要である.この目的のため,Okuboらの方法に準じて3′末端特異的cDNAライブラリを作製し,ライブラリのシークエンス解析およびデータベース検索を行っている.本方法でクローニングされるcDNAは3′末端の約250bpを含み,mRNA分子種を区別するに十分な情報を持つ.また,標的遺伝子は出現頻度の変化として同定できる.現在までのところ,IL-2刺激した細胞由来ライブラリの解析には至っていないが,未刺激T細胞由来ライブラリを約400クロン解析した結果,複数の新規遺伝子の候補を得ている.今後IL-2刺激依存性に発現誘導される遺伝子群の同定を行いたい.
进行以下实验的目的是鉴定选择性偶联 IL-2 信号转导的第二信使系统和靶基因 [1] 分析 IL-2 刺激激活的细胞内信号转导基因 各种细胞在用 IL-2 刺激后溶解。如图2所示,使用抗磷酸酪氨酸抗体通过Western方法寻找以IL-2依赖性方式进行酪氨酸磷酸化的细胞内底物。结果,在以IL-2刺激依赖性方式转染IL-2受体β链(IL-2Rβ)的人NK样细胞YTS和BAF/B03细胞中,检测到pp100是常见的磷酸化底物;来自 IL-2Rβ 转基因小鼠的细胞尚未获得类似的结果 [2] 尝试分离对 IL-2 刺激有反应的靶基因。为了确定IL-2刺激的靶基因,需要一种能够高灵敏度检测IL-2刺激前后基因表达变化的实验系统,我们创建了cDNA文库,并正在进行序列分析和数据库搜索。使用此方法克隆的 cDNA 包含大约 250 bp 的 3' 末端。 ,有足够的信息来区分 mRNA 分子种类,此外,目标基因可以通过出现频率的变化来识别。迄今为止,我们还无法分析来自用 IL-2 刺激的细胞的文库。通过分析大约 400 个 T 细胞来源的文库克隆,我们获得了几个新的候选基因。将来,我们希望鉴定一组以 IL-2 刺激依赖性方式诱导表达的基因。
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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