カドヘリン依存細胞接触による細胞膜ラフリング及び運動の制御機構

钙粘蛋白依赖性细胞接触控制细胞膜波纹和运动的机制

基本信息

批准号：
07F07621
负责人：
竹市雅俊
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

U251グリア腫細胞株を用いて、細胞接触に依存した細胞運動の停止に関する分子機構の研究を続行した。前年度までに、細胞運動の制御因子Nap1が細胞接触時に、細胞周縁部から消失すること、また、これがN-cadherinおよびその機能を支えるαE-cateninに依存することを明らかにしていた。今年度は、この細胞に、Nap1-GFPを導入して、細胞接着時における勲態をライブイメージングにより観察した。その結果、細胞接触時、Nap1-GFPが速やかに細胞周縁部から消失するだけでなく、細胞質に拡散することを確認した。さらに、αE-cateninを除去した細胞ではこの消失が抑制された。一方、N-cadherinの除去ではNap1-GFPの挙動に対する効果が弱かったので、他のカドヘリンが存在する可能性が示唆された。実際、種々のカドヘリンに結合するβ-cateninが、N-cadherinノックダウン細胞の細胞間境界に観察された。そこで、U251細胞からβ-catenin共沈物を集め質量分析した結果、R-cadherinが含まれていることが分かった。これにより、カドヘリンの、接触依存運動停止における役割について、より精密に解析することが可能になった。本研究終了後は、Nap1が細胞接触領域から消える分子メカニズムについて理解を深めるため、両カドヘリン除去前後におけるNap1結合因子の違いを、質量分析により調べる実験を計画している。

使用 U251 神经胶质瘤细胞系，我们继续研究细胞接触依赖性细胞运动停滞的分子机制。直到去年，我们才发现细胞运动调节因子 Nap1 在细胞接触时从细胞外周消失，这依赖于支持其功能的 N-钙粘蛋白和 αE-连环蛋白。今年，我们将 Nap1-GFP 引入这些细胞中，并使用实时成像观察了它们在细胞粘附过程中的行为。结果，我们证实，在细胞接触后，Nap1-GFP不仅迅速从细胞外周消失，而且扩散到细胞质中。此外，在去除 αE-连环蛋白的细胞中，这种损失受到抑制。另一方面，去除 N-钙粘蛋白对 Nap1-GFP 的行为影响较弱，表明可能存在其他钙粘蛋白。事实上，在 N-钙粘蛋白敲低细胞的细胞间边界处观察到了与各种钙粘蛋白结合的 β-连环蛋白。因此，我们从U251细胞中收集了β-连环蛋白共沉淀物并进行了质谱分析，结果表明它们含有R-钙粘蛋白。这使得更精确地分析钙粘蛋白在接触依赖性运动停止中的作用成为可能。完成本研究后，我们计划利用质谱法进行实验，研究去除两种钙粘蛋白前后Nap1结合因子的差异，以更好地了解Nap1从细胞接触区域消失的分子机制。