細胞間認識機構とがん特性

细胞间识别机制与癌症特征

基本信息

批准号：
01015043
负责人：
竹市雅俊
金额：
$ 5.5万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

偏平上皮がんで発現されるP型カドヘリンの遺伝子をcDNAをプローとしてクローニングした。その結果、遺伝子上流10Kbpを含む遺伝子全長のクローニングに成功した。次に、P型カドヘリン遺伝子の上流域を翻訳開始点の直前でCAT構造遺伝子に連結し、P型カドヘリンを発現している細胞および発現していない細胞に導入してCAT活性を測定し、この遺伝子のプロモーター活性を調べた。その結果、P型カドヘリンを発現する細胞でのみ活性がみられ、遺伝子上流中に細胞タイプ特異的な発現を支配する領域があるものと考えられた。また、翻訳開始点の270bp上流からCATに連結したときは、非翻訳領域を500bp以上含むにもかかわらず、同様のDNA構築でも全く活性が検出できず、翻訳開始点の近傍は転写に必須のようである。一方、遺伝子上流域のみで一応の特異的発現はみられたが、その発現量は非常に弱く、生体内の状態を反映するには不十分のように思われた。そこで、カドヘリンに特徴的な長いイントロンに着目してエンハンサー活性を調べた。前述のP型カドヘリン遺伝子上流を含むDNAのCAT遺伝子下流に、P型カドヘリン第一イントロンから16Kbpを切り出して6Kbpと10Kbpの2つのDNA断片に分けて、それぞれ順逆両方面に挿入した。その結果、イントロンのそれぞれの断片について、挿入方向と無関係に数倍から数十倍のCAT活性の増強がみられた。すなわちイントロンには、エンハンサーの活性が備えられていると言える。また、3Y1細胞を用い、srcによるトランスフォーメイションによりカドヘリンの発現が低下することなどを見いだした。

由高原上皮表达的P型钙粘着蛋白的基因被cDNA作为Pro。结果，他成功地克隆了基因的总长度，包括上游的10kbp。接下来，P Cadhhelin基因的上盆地在翻译起点之前与CAT结构基因相连，并且通过将其引入表达P Cadhelin和未表达的细胞的细胞来测量CAT活性基因的启动子活性。结果，认为只有表达P型Cadhhelin的细胞被激活，并且有一个区域控制基因上游基因中细胞类型的特异性表达。同样，当从翻译起点开始点270bp的上游连接到猫时，即使非翻译区域包含500bp或更多，也无法完全检测到相同的DNA构造，而翻译起点附近对于传输至关重要。就是这样。另一方面，尽管仅在基因的上盆地中看到了特定的表达，但表达非常弱，并且似乎不足以反映体内的状态。因此，我们专注于长长的内含子，该内含子是克粉链素的特征，以检查增强子活性。 p-型CADHELIN基因上游的P型cAdhing基因的DNA猫基因下游切割，该基因从p -cadhelin daiichi内含子中切出，分为两个DNA片段，分为两个DNA片段，6Kbp和10kbp，并插入它，并插入它双方。结果，每个内含子的每个片段被增强多次，达到插入方向的数十倍。换句话说，内含子具有增强功能。还发现3Y1细胞用于降低由于SRC的移植引起的Cadhhelin的表达。