性ステロイドホルモンとアンチセンス遺伝子による婦人科癌細胞株増殖制御

通过性类固醇激素和反义基因控制妇科癌细胞系生长

基本信息

批准号：
06771329
负责人：
伊藤直樹
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771329/
关键词：
子宮癌細胞 Ki-ras 点遺伝子変異 c-myc c-fos c-jun アンチセンス遺伝子増殖抑制効果

项目摘要

癌遺伝子に対するアンチセンス遺伝子の持つ抗腫瘍効果の有用性についてin vitroで検討した。今回対象としたのは当科で継代培養中の婦人科癌細胞である子宮頚癌由来のHeLa、MS-751、子宮体癌由来のHHUA、HEC、ISHIKAWA、卵巣癌由来のSKOV-3、MCASである。Ki-rasについてその遺伝子変異を検討すると、HHUAがGGT→GTT、HEC、MCASがGGT→GATの点遺伝子変異を持っていた。そこでそれぞれの遺伝子変異に特異的な15merのアンチセンス遺伝子(AS-ODNs)を作製し、培養液中に添加した。無修飾のODNsは容易に血清中のDNaseにより分解されるため、今回使用したODNsは全てphosphorothioate処理を行った。結果、殆どの細胞株は特異的な反応を示さなかったが、HECにおいてのみ特異的に10μM以上で増殖抑制効果を示した。同時に行ったウエスタンブロッティングでもAS-ODNsによって特異的にKi-ras蛋白の発現が抑制されていることが確認された。しかし10μMといった高濃度では非特異的な作用も強くこのままでは臨床応用は困難である。次いで、癌遺伝子である、c-myc、c-fos、c-junについても検討を行った。結果、c-fos、c-junにおいては特異的な作用を認めなかったが、c-mycにおいては5μMでも特異的な増殖抑制効果が検討した全ての細胞株において確認された。しかし、この作用は非特異的であり、正常細胞に関しても強い作用を持つことが予想された。性ステロイドホルモンやアドリアシン等の抗癌剤との併用も相乗効果は示さなかった。phosphorothioate ODNsについては現在その生体内での代謝、副作用が未知数でありアンチセンス鎖の位置の選択、長さ、その他の修飾も含め、今後もさらなる検討が必要と思われた。

在体外研究了反义基因针对癌症基因的抗肿瘤作用的有用性。这次，我们针对的是我们科室正在传代培养的妇科癌细胞：源自宫颈癌的HeLa和MS-751，源自子宫内膜癌的HHUA、HEC和ISHIKAWA，以及源自卵巢癌的SKOV-3。当我们检查Ki-ras的基因突变时，我们发现HHUA有GGT→GTT的点基因突变，HEC和MCAS有GGT→GAT的点基因突变。因此，创建了针对每个基因突变的 15mer 反义基因 (AS-ODN) 并将其添加到培养基中。由于未修饰的 ODN 很容易被血清中的 DNase 降解，因此本研究中使用的所有 ODN 均经过硫代磷酸酯处理。结果，大多数细胞系没有表现出特异性反应，但只有 HEC 在 10 μM 或更高浓度时表现出特异性的生长抑制作用。同时进行的Western blotting也证实Ki-ras蛋白的表达被AS-ODN特异性抑制。但在10μM等高浓度下，非特异性作用较强，给临床应用带来困难。接下来，我们还研究了癌基因 c-myc、c-fos 和 c-jun。结果，没有观察到对c-fos或c-jun的特异性作用，但在所有检查的细胞系中，即使在5μM时也证实了对c-myc的特异性生长抑制作用。然而，这种效应是非特异性的，预计也会对正常细胞产生强烈影响。与性类固醇激素和阿德里亚辛等抗癌药物联合使用也没有显示出协同作用。目前，硫代磷酸ODN的体内代谢和副作用尚不清楚，未来需要进一步研究，包括反义链的位置、长度和其他修饰的选择。