表現型・遺伝子発現パターンに基づくマウス体細胞クローン着床期異常の原因究明

基于表型和基因表达模式研究小鼠体细胞克隆植入阶段异常的原因

基本信息

批准号：
17700382
负责人：
井上貴美子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700382/
关键词：
体細胞クローン胎盤定量RT-PCR 遺伝子発現胎盤外円錐 FGF4 胎盤形成

项目摘要

本年度は主に体細胞クローン技術により作製された初期胚を用いて胎盤関連遺伝子の定量RT-PCRによる発現量の解析を行った。正確な発現データを取るために、解析には単一胚を検体として用いることとした。単一胚の転写産物は非常に微量であるため、IVTによる増幅方法、SPIAプライマーを用いるRibo-SPIA増幅方法の検討を行った。結果としてIVTによる増幅法が増幅をしないサンプルと比較して定量解析の再現性があることや、多量の増幅産物が得られることから、遺伝子発現量の解析にはIVT増幅サンプルを用いた。定量に利用した遺伝子は未分化栄養膜細胞の増殖因子であるFGF4、その他の胎盤形成に関わる遺伝子であるFGFR2(IIIb、IIIc)、細胞の多能性維持に関与する転写因子であるOct4、同様に未分化細胞での発現が確認されている転写因子Sox2そして内部コントロールとしてChuk、Gapdh、Hprtの測定値をを利用した。その結果、調べた全ての検体(体外受精胚9個、卵丘細胞クローン胚9個)について、FGF4の発現が確認され、また発現量もGapdhをコントロールとした場合を除き、体外受精胚に比べ高いという予想外の結果が得られた。また他の遺伝子FGFR2(IIIb,IIIc)、Oct4、Sox2もクローン胚の方が有意に高いことが明らかとなった。Gapdhについては、他の二種類のコントロールに対しクローン胚における絶対値が2倍以上高く、このことが発現量の差を打ち消してしまうためと考えられた。すなわち、FGF4の発現低下が胎盤形成不全の原因になっていると予想したのとは全く逆で、総じて遺伝子発現量は体外受精胚よりクローン胚の方が高いことが明らかになった。現在は、この遺伝子発現亢進がどのように今後の着床、胎盤形成に関わって来るのかを明らかにすべく、抗体染色を用いた組織的解析を行っているところである。

今年，我们使用主要由体细胞克隆技术产生的早期胚胎通过定量RT-PCR分析了胎盘相关基因的表达水平。为了获得准确的表达数据，将单个胚胎用作用于分析的标本。由于单个胚胎的转录本很小，因此我们使用IVT和使用SPIA引物的Ribo-SPIA扩增方法研究了扩增方法。结果，与未放大的样品相比，定量分析中可以再现IVT扩增方法，并且可以获得大量扩增产物，因此使用IVT扩增样品来分析基因表达水平。用于定量的基因是FGF4，这是未分化的滋养细胞细胞中的生长因子FGFR2（IIIB，IIIC），另一个涉及胎盘形成的基因OCT4，一种涉及细胞多能性的转录因子，涉及的转录因子，SOX2，SOX2，SOX2，SOX2，一种转录因子，也已证实，也已在未施加的细胞中表达了chuk和chuk and chuk and chuk and chuk and chuk and chuk gap and gap and gap gap gap and gap gap gap and gap gap and gap gap and gap gap and gap。结果，所有检查的标本（9个体外受精的胚胎和9个积云克隆胚胎）均显示出意外的结果，表达水平高于体外受精的胚胎，除非GAPDH用作对照。还揭示了其他基因FGFR2（IIIB，IIIC），OCT4和SOX2在克隆的胚胎中显着更高。关于GAPDH，克隆的胚胎中的绝对值是其他两种对照的两倍以上，这被认为取消了表达水平的差异。换句话说，与我们期望成为胎盘发育不良的原因相反，并且发现克隆胚胎中的基因表达水平通常高于体外受精胚。目前，我们正在使用抗体染色进行组织分析，以阐明这种增加的基因表达将如何参与将来的植入和胎盘形成。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Inefficient reprogramming of hematopoietic stem cells genome following nuclear transfer.

核移植后造血干细胞基因组的低效重编程。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
J Cell Sci. 15
影响因子：
0
作者：
Kanatsu-Shinohara M.;Inoue K. et al.;Inoue K. et al.
通讯作者：
Inoue K. et al.

Intra-strain polymorphisms are detected but no genomic alteration is found in cloned mice.

检测到品系内多态性，但在克隆小鼠中未发现基因组改变。

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Biochem Biophys Res Commun 15
影响因子：
0
作者：
Gotoh K.;Inoue K.et al.
通讯作者：
Inoue K.et al.

再生医療のための分子生物学核移植クローンとリプログラミング

再生医学分子生物学核转移克隆和重编程

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
井上貴美子;小倉淳郎
通讯作者：
小倉淳郎

Variation in gene expression and aberrantly regulated chromosome regions in cloned mice

DOI：
10.1095/biolreprod.105.044958
发表时间：
2005-12-01
期刊：
BIOLOGY OF REPRODUCTION
影响因子：
3.6
作者：
Kohda, T;Inoue, K;Ishino, F
通讯作者：
Ishino, F

Chorioallantoic placenta defects in cloned mice.

DOI：
10.1016/j.bbrc.2006.08.057
发表时间：
2006-10
期刊：
Biochemical and biophysical research communications
影响因子：
3.1
作者：
N. Wakisaka-Saito;T. Kohda;K. Inoue;N. Ogonuki;H. Miki;Takafusa Hikichi;E. Mizutani;T. Wakayama;T. Kaneko-Ishino;A. Ogura;F. Ishino
通讯作者：
N. Wakisaka-Saito;T. Kohda;K. Inoue;N. Ogonuki;H. Miki;Takafusa Hikichi;E. Mizutani;T. Wakayama;T. Kaneko-Ishino;A. Ogura;F. Ishino