組織特異性を有する遺伝子導入ベクター(改変型アデノウイルス)の開発

组织特异性基因转移载体（改良腺病毒）的开发

• 批准号: 13877113
• 负责人: 上野 光
• 金额: --
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13877113/
• 关键词: アデノウイルス; 遺伝子導入; 遺伝子治療; 組織特異性; 組織因子

生体内遺伝子導入による病態修飾が可能であることが動物モデルで実証されてきたが、細胞や組織特異的な遺伝子導入が可能となれば、副作用が減り導入の利便性が増加するためさらにその有用性は増す。本研究では選択的遺伝子導入を可能とする組織特異性を有する新規ベクター(組換えアデノウイルス)の開発を目的とした。具体的目標として組織因子に特異性を持つ改変型アデノウイルスの開発をめざした。組織因子は血栓形成、炎症、細胞浸潤・遊走、がん細胞の転移、組織修復、血管新生といったストレス・傷害に対する生体反応の場でその発現が亢進している。従って組織因子特異的な遺伝子導入が可能となれば、炎症や創傷治癒そして病的血管新生部位に選択性の高い遺伝子導入が可能となり、より安全で便利な遺伝子治療の開発に繋がる。以下の2つの方法を用いて開発を試みた。1)ファージライブラリーを用いて、組織因子に選択的に親和性の高いモチーフペプチドを同定し、同ペプチドを外套蛋白に発現する改変型アデノウイルスを開発する。2)アデノウイルスの外套蛋白に対する単鎖抗体と組織因子に対する単鎖抗体を融合した2価の単鎖抗体を作製し、これをアデノウイルス外套蛋白に架橋して細胞選択性を付与する。現在、組織因子への単鎖抗体は取れた段階でウイルス構築には至っていない。濱田はアデノウイルス受容体CARに結合しないAd40の短ファイバーの末端にNG2糖蛋白(黒色腫や脳腫瘍細胞で高発現)へのリガンドを付与したファイバーを持つアデノウイルスを構築した。このウイルスは静注しても肝臓には集積せず、NG2蛋白発現細胞への選択的遺伝子導入が達成された。組織因子への親和性リガンド付与により、静注で組織因子発現細胞へ選択的に遺伝子導入できるアデノウイルスの開発が可能であることを支持する結果である。

动物模型已证明，体内基因转移可以改变病理状况，但如果细胞和组织特异性基因转移成为可能，它将更加有用，因为它可以减少副作用并增加转移的便利性. 性增加。本研究的目的是开发一种具有组织特异性的新载体（重组腺病毒），能够实现选择性基因转移。具体目标是开发具有组织因子特异性的改良腺病毒。组织因子表达在对应激和损伤的生物反应中增加，例如血栓形成、炎症、细胞浸润/迁移、癌细胞转移、组织修复和血管生成。因此，如果组织因子特异性基因转移成为可能，那么高度选择性的基因转移到炎症、伤口愈合和病理性血管生成部位将成为可能，从而导致更安全、更方便的基因治疗的发展。我们尝试使用以下两种方法进行开发。 1) 使用噬菌体文库，我们将鉴定对组织因子具有高选择性亲和力的基序肽，并开发一种在其套蛋白中表达相同肽的改良腺病毒。 2) 通过融合针对腺病毒外壳蛋白的单链抗体和针对组织因子的单链抗体来产生二价单链抗体，并将其与腺病毒外壳蛋白交联以赋予细胞选择性。目前，针对组织因子的单链抗体已经获得，但病毒尚未构建。 Hamada 构建了一种腺病毒，其具有不与腺病毒受体 CAR 结合的 Ad40 短纤维，以及末端附有 NG2 糖蛋白（在黑色素瘤和脑肿瘤细胞中高度表达）配体的纤维。该病毒即使静脉注射后也不会在肝脏中积聚，并且实现了选择性基因转移到表达NG2蛋白的细胞中。这些结果支持开发一种腺病毒的可能性，该腺病毒可以通过将亲和配体附着到组织因子上，通过静脉注射选择性地将基因引入组织因子表达细胞中。