新規アデノウイルスベクターによるヒト造血幹細胞への遺伝子導入の最適化

使用新型腺病毒载体优化基因转移至人类造血干细胞

基本信息

批准号：
16790117
负责人：
櫻井文教
金额：
$ 2.18万
依托单位：
独立行政法人医薬基盤研究所 (2005)National Institute of Health Sciences (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

まず本年度は、ヒト造血幹細胞を含む画分である骨髄由来CD34陽性細胞において最も高い転写活性を示したCAプロモーター(cytomegarovirus由来エンハンサーおよびβ-actinプロモーターにβ-actinのイントロンを加えたプロモーター)を搭載した35型アデノウイルス(Ad)ベクターを用いて検討を行った。CAプロモーターを搭載した35型Adベクターにより遺伝子発現を示したCD34陽性細胞が自己増殖能ならびに分化能を有しているかどうかについてcolony-formingアッセイを用いて検討したところ、遺伝子発現細胞は未処理細胞とほぼ同程度のコロニーを形成した。また遺伝子発現細胞においては、最も未分化な細胞由来のコロニーであるCFU-Mixコロニーの形成も観察された。従って35型ベクターは造血前駆細胞にも遺伝子導入可能であること、また遺伝子発現細胞は自己増殖能および分化能を有していることが明らかとなった。35型Adベクターを用いることでヒト造血幹細胞に対し高効率な遺伝子導入が可能になったことから、自己複製関連遺伝子を導入し、造血幹細胞の自己複製を試みた。自己複製関連遺伝子としては、HoxB4およびBmi1を選択した。ヒト骨髄由来CD34陽性細胞に対し、35型Adベクターを用いてこれらの遺伝子を導入したところ、有意な自己増殖促進は見られなかった。現在、これらの遺伝子の発現レベルを調製することにより自己増殖促進が観察されないかどうか検討するとともに、その他の自己複製関連遺伝子について検討中である。

首先，今年我们安装了在骨髓来源的CD34阳性细胞中表现出最高转录活性的CA启动子（带有巨细胞病毒来源的增强子和在β-肌动蛋白启动子上添加了β-肌动蛋白内含子的启动子），我们使用 35 型腺病毒 (Ad) 载体进行了一项研究。使用集落形成测定，我们研究了使用携带 CA 启动子的 35 型 Ad 载体显示基因表达的 CD34 阳性细胞是否具有自我增殖和分化的能力，它们形成了大致相同数量的集落。在基因表达细胞中，还观察到CFU-Mix集落的形成，其是来自最未分化细胞的集落。因此，揭示35型载体还可以将基因导入造血祖细胞，并且表达基因的细胞具有自我增殖和分化的能力。由于使用35型Ad载体可以高效地将基因转移到人类造血干细胞中，因此我们引入了与自我更新相关的基因并尝试了造血干细胞的自我更新。 HoxB4和Bmi1被选为自我更新相关基因。当使用35型Ad载体将这些基因导入人骨髓来源的CD34阳性细胞时，没有观察到显着的自我增殖促进。我们目前正在研究是否可以通过调整这些基因的表达水平来观察自我增殖促进，并且也在研究其他与自我更新相关的基因。