新規アデノウイルスベクターによるヒト造血幹細胞への遺伝子導入の最適化

使用新型腺病毒载体优化基因转移至人类造血干细胞

基本信息

批准号：
16790117
负责人：
櫻井文教
金额：
$ 2.18万
依托单位：
独立行政法人医薬基盤研究所 (2005)National Institute of Health Sciences (2004)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

まず本年度は、ヒト造血幹細胞を含む画分である骨髄由来CD34陽性細胞において最も高い転写活性を示したCAプロモーター(cytomegarovirus由来エンハンサーおよびβ-actinプロモーターにβ-actinのイントロンを加えたプロモーター)を搭載した35型アデノウイルス(Ad)ベクターを用いて検討を行った。CAプロモーターを搭載した35型Adベクターにより遺伝子発現を示したCD34陽性細胞が自己増殖能ならびに分化能を有しているかどうかについてcolony-formingアッセイを用いて検討したところ、遺伝子発現細胞は未処理細胞とほぼ同程度のコロニーを形成した。また遺伝子発現細胞においては、最も未分化な細胞由来のコロニーであるCFU-Mixコロニーの形成も観察された。従って35型ベクターは造血前駆細胞にも遺伝子導入可能であること、また遺伝子発現細胞は自己増殖能および分化能を有していることが明らかとなった。35型Adベクターを用いることでヒト造血幹細胞に対し高効率な遺伝子導入が可能になったことから、自己複製関連遺伝子を導入し、造血幹細胞の自己複製を試みた。自己複製関連遺伝子としては、HoxB4およびBmi1を選択した。ヒト骨髄由来CD34陽性細胞に対し、35型Adベクターを用いてこれらの遺伝子を導入したところ、有意な自己増殖促進は見られなかった。現在、これらの遺伝子の発現レベルを調製することにより自己増殖促進が観察されないかどうか検討するとともに、その他の自己複製関連遺伝子について検討中である。

首先，今年，我们使用配备有CA启动子的35型腺病毒（AD）载体（AD）载体（源自细胞瘤病毒的启动子和β-肌动蛋白启动子，该启动子在骨髓衍生的CD34阳性细胞中表现出最高的转录活性，这些细胞表现出最高的转录活性。使用菌落形成测定法检查了携带Ca启动子的载体，表达基因的细胞几乎形成了与未经处理的细胞相同的菌落。祖细胞，表达基因的细胞具有自我增殖和分化的潜力。将HOXB4和BMI1选为自我更新相关的基因。当使用35型AD载体将这些基因引入人骨骨髓衍生的CD34阳性细胞中时，未观察到自我增殖的显着促进。目前，我们正在研究是否通过准备这些基因的表达水平观察到自我增殖促进，目前正在研究其他自我更新相关的基因。