ハイブリッド型リボザイムライブラリを用いた新規がん転移関連遺伝子の同定と機能解析

使用混合核酶文库鉴定新型癌症转移相关基因并进行功能分析

基本信息

批准号：
15659299
负责人：
上野光
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

リボザイムはRNAを構成成分とし,標的mRNAを認識して切断する.リボザイムのmRNA認識部位である約20塩基をランダム化させ,理論上あらゆるmRNAを認識するリボザイムライブラリーを発現ベクターに組みこんだハイブリッド型リボザイムライブラリーを作成した(東大多比良研究室にて)。ヒト大腸癌由来でヌードマウスにおいて脾臓から肝臓へ転移するがん細胞や、ヒト腎臓がん由来で転移能を獲得していない親株細胞と,転移能を獲得した子細胞株(親株をヌードマウス腎臓皮膜に移植し,肺転移する細胞を繰り返し選抜して得られた)を中心に3種類のがん細胞を準備し、各々の性状を解析し確認した。そこで作成したハイブリッド型リボザイムライブラリーをこれらのヒト癌由来がん細胞に導入して、浸潤能に関する形質が変化することを指標に、転移に関わる遺伝子の同定を試みた。実験担当者の長期病気療養があって初年度の研究計画が大幅に遅れたため転移に関わる新規遺伝子の同定には至っていない。しかし成果が期待できる研究であるため、引き続き研究を継続し、転移能獲得に必要な遺伝子群を必ず同定したい。転移能を喪失する系と転移能を獲得する系の両方で分子群を検索する。候補遺伝子が同定できれば、組換えアデノウイルスに組み込み,細胞レベルでの形質転換を確認する。さらにヌードマウスを用いたin vivoの系で転移を規定する遺伝子であるかどうかを確認したい。本研究成果はまだ論文発表できていない。研究活動状況を示す参考までに研究代表者の2004年度の発表論文を添付した。

核酶由RNA组成，可识别并切割目标mRNA。将作为核酶的mRNA识别位点的约20个碱基随机化的杂合体，并将理论上可识别任何mRNA的核酶文库整合到表达载体A型核酶文库中。被创建（在东京大学田平实验室）。裸鼠体内从脾脏转移到肝脏的人结肠癌来源的癌细胞、未获得转移能力的人肾癌来源的亲本细胞系、以及已获得转移能力的子细胞系（亲本细胞系衍生自我们制备了三种类型的癌细胞（通过反复选择移植到膜中并转移到肺部的细胞而获得），并分析和确认了每种癌细胞的特性。在那里创建的混合核酶文库被引入这些人类癌症衍生的癌细胞中，作者试图利用与侵袭能力相关的性状变化作为指标来识别与转移有关的基因。由于实验负责人长期患病治疗，第一年的研究计划被大幅推迟，因此尚未发现与转移相关的新基因。然而，由于这项研究很有前景，我们希望继续研究并确保确定获得转移潜力所需的基因组。在失去转移能力的系统和获得转移能力的系统中寻找分子组。一旦确定了候选基因，就将其整合到重组腺病毒中以在细胞水平上确认转化。此外，我们想确认这是否是一个在裸鼠体内系统中调节转移的基因。这项研究的结果尚未以论文形式发表。附上主要研究者 2004 年发表的论文作为参考，以显示研究活动的状况。