リボザイムライブラリーを使用したヒトGH遺伝子LCR関連蛋白の同定とその機能解析

利用核酶文库鉴定人GH基因LCR相关蛋白及其功能分析

• 批准号: 15659221
• 负责人: 千原 和夫
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659221/
• 关键词: 成長ホルモン; 下垂体; locus control region; 遺伝子クローニング; リボザイムライブラリー; RNAiライブラリー; iRNAライブラリー

GH遺伝子の上流約14.5kbにGH遺伝子発現を規定するlocus control region (LCR)があり、このLCRが生理的なGH発現を調節する重要な領域であることが最近明らかとなってきた。このLCRに作用して、機能を制御するタンパクを同定することを目的に次の実験を行なった。ヒトGHLCRの下流にGH遺伝子プロモーター、さらにその下流にGFPcDNAを結合した発現ベクターを構築した。この順番が保たれるよう、このベクターを直線化し、GH3細胞(下垂体GH、PRL産生細胞)にトランスフェクションしGFPが産生されることを確認した。一方、Cos細胞(線維芽細胞、コントロールとして使用)にトランスフェクションしたところ、GFPの産生は認められなかった。組み込まれたゲノム領域の外来性遺伝子発現に及ぼす影響は、LCRがあると出現しにくいことが報告されており、このGFP陽性細胞では、ゲノムに組み込まれた外来遺伝子由来のGH遺伝子LCRとプロモーターによってGFP発現がおこっていることが期待される。

GH基因上游约14.5kb处是调节GH基因表达的基因座控制区(LCR)，最近已明确该LCR是调节生理性GH表达的重要区域。进行以下实验的目的是鉴定作用于该LCR并控制其功能的蛋白质。构建表达载体，其中GH基因启动子连接至人GHLCR下游，并且GFP cDNA进一步连接至GH基因启动子下游。将该载体线性化以维持该顺序，并将其转染至GH3细胞(垂体GH、PRL产生细胞)中，并确认产生GFP。另一方面，当转染Cos细胞（成纤维细胞，用作对照）时，没有观察到GFP产生。据报道，在LCR存在的情况下，整合的基因组区域对外源基因表达的影响不太可能发生，并且在这些GFP阳性细胞中，源自外源基因的GH基因LCR和启动子整合到基因组中预期 GFP 表达正在发生。

项目成果

Murata M: "A study of carotid intima-media thickness in GH-deficient Japanese adults during onset among adults and children"Euro J Endocrinol. 148. 333-338 (2003)

Murata M：“关于成人和儿童 GH 缺乏的日本成人发病期间颈动脉内膜中层厚度的研究”Euro J Endocrinol。

Okimura Y: "The role of circulating ghrelin in growth hormone (GH) secretion in freely-moving rats"Life Sci. 72. 2517-2524 (2003)

Okimura Y：“循环生长素释放肽在自由活动大鼠生长激素 (GH) 分泌中的作用”生命科学。

Kishimoto M: "Mutant form of Pit-1 (R271W) does not act as a dominant inhibitor of Pit-1 action to activate the promoters of growth hormone and prolactin genes"Euro J Endocrinol. 148. 619-625 (2003)

Kishimoto M：“Pit-1 (R271W) 的突变形式不会作为 Pit-1 作用的显性抑制剂来激活生长激素和催乳素基因的启动子”Euro J Endocrinol。

Yoshioka S: "Up-regulation of mitochondrial transcription factor1 mRNA levels by GH in VSMC"Life Sci. 74. 97-109 (2004)

Yoshioka S：“VSMC 中 GH 上调线粒体转录因子 1 mRNA 水平”生命科学。

Kishimoto M: "Cloning and characterization of the 5'-flanklng region of the human ghrelin gene."Biochemical and Biophysical Research Communications. 305. 186-192 (2003)

Kishimoto M：“人类生长素释放肽基因 5-侧翼区域的克隆和表征。”生物化学和生物物理研究通讯。