cell-trapping法を用いたES細胞からの下垂体細胞の分化単離

使用细胞捕获法从 ES 细胞中分化和分离垂体细胞

基本信息

批准号：
13877171
负责人：
千原和夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877171/
关键词：
下垂体 ES細胞細胞分化転写因子

项目摘要

本研究の目的は、下垂体の初期発生に関与すると想定される種々の転写因子をES細胞に発現させ、ES細胞が下垂体の方向に分化しないか検討することである。まず、下垂体の発生初期に出現する転写因子がES細胞の培養条件の変動によって如何に変化するかRT-PCRで調べた。ES細胞をembryoid bodyを形成させた後、あるいは形成させずに、LIF存在下、あるいは非存在下で培養を行ない、経時的にtotal RNAを抽出、これをもとににRT-PCRを行なった。下垂体形成の初期に出現するPtx-1,Ptx-2 mRNAは、いずれの条件でも出現した。Lhx-3 mRNAも出現する傾向にあった。さらに、培養期間を延長すると、驚いたことに成長ホルモン(GH) mRNAも出現した。この成績は、ES細胞が一様にGH産生細胞の方向に分化したわけでなく、一部のES細胞がGH産生細胞の方向に自発的に分化したため得られたものだと解釈している。実際に、GHmRNAを発現する細胞はどの程度あるのか、GH蛋白も産生されているのかについては、今後明らかにする必要がある。このような条件で培養したES細胞の一部は、すでに下垂体の方向にコミットメントされている可能性があり、このような細胞をさらに分化させることを計画している。すなわち、さらに多数の細胞をGH産生細胞の方向に分化させることを目的に、Ptx-1,Ptx-2,Lhx-3に引き続いて出現する転写因子であり、GH産生細胞の分化に重要なProp-1およびPit-1を強制的に発現させ、発現細胞の形質変化を調べる予定である。

本研究的目的是在ES细胞中表达被认为参与垂体早期发育的各种转录因子，并检查ES细胞是否分化为垂体。首先，我们使用 RT-PCR 来检查垂体发育早期出现的转录因子如何因 ES 细胞培养条件的变化而发生变化。 ES细胞形成或不形成胚状体后，在存在或不存在LIF的情况下培养，随时间提取总RNA，并基于此进行RT-PCR。在垂体形成早期出现的 Ptx-1 和 Ptx-2 mRNA 在所有条件下均出现。 Lhx-3 mRNA 也倾向于出现。此外，当培养时间延长时，令人惊讶的是，生长激素（GH）mRNA也出现了。我们的解释是，获得这个结果是因为ES细胞并未均匀地向GH产生细胞的方向分化，而是一些ES细胞自发地向GH产生细胞的方向分化。有多少细胞真正表达GH mRNA以及是否也产生GH蛋白仍有待未来确定。在这些条件下培养的一些 ES 细胞可能已经被定向到垂体，我们计划进一步分化这些细胞。换句话说，它是在Ptx-1、Ptx-2和Lhx-3之后出现的转录因子，对于GH产生细胞的分化很重要，我们计划强制表达-1和Pit-1并进行研究。表达细胞的表型变化。