DNAマイクロアレイを利用したてんかん治療薬の新規標的分子の検索

使用 DNA 微阵列寻找癫痫药物的新靶分子

基本信息

批准号：
12877016
负责人：
斎藤尚亮
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

DNAマイクロアレイを用いたてんかん関連分子の検索と候補遺伝子の絞り込み野生型マウス脳とグルタミン酸トランスポーター(GLT-1)ノックアウト(KO)マウス脳からそれぞれmRNAを抽出し、それらを鋳型にしてランダムプライマーを用いてcDNAプローブを作製し、DNAマイクロアレイに適用した。野生型マウスとGLT-1 KOマウスの遺伝子発現のプロフィールの差異をコンピューター解析し、GLT-1 KOマウスにおいて特異的に発現が増加あるいは減少している遺伝子を検索し、数多くの候補遺伝子が見いだされた。その多くは、従来遺伝子機能の不明なESTタグがほとんであったが、昨今、マウスの全長cDNA配列の決定が進み、それらESTタグの配列と報告されているマウスの全長cDNA配列を比較検討することにより、その機能がある程度予測可能でかつ、脳に発現していることが確認できる候補遺伝子が見いだされた。それら候補遺伝子には、様々なシグナル伝達に寄与すると考えられるセリン・スレオニンリン酸化酵素、ユピキチン連結酵素に相同な構造を持つもの、カチオンチャネル、カルシウム輸送酵素、低分子量GTP結合蛋白質等の機能を持つ興味あるものが含まれている。現在、これらの候補遺伝子に特に注目し、1)ヘテロ型GLT-1 KOマウスにおいても、発現に差異がでるものを選出する、2)電気ショックなどで人為的に痙攣発作を誘発したマウスと正常マウスを用いてDNAマイクロアレイを行い、発現に差異が出た遺伝子と1)で発現に差異が出た遺伝子を比較し、一致するものは、てんかん発作自身によって発現が変化した遺伝子と判断し、本研究の目的遺伝子から除外する、などの検討を行い、てんかんの発症や予防に関連し、さらに、新しい抗てんかん薬の標的になりうる分子の絞り込みを行っている。

使用DNA微阵列搜索癫痫相关分子并缩小候选基因范围，从野生型小鼠大脑和谷氨酸转运蛋白（GLT-1）敲除（KO）小鼠大脑中提取mRNA，并使用它们作为模板和随机引物。创建并应用于 DNA 微阵列。我们对野生型小鼠和GLT-1 KO小鼠之间基因表达谱的差异进行了计算机分析，寻找在GLT-1 KO小鼠中表达特异性增加或减少的基因，并发现了许多候选基因。此前，这些大多是基因功能未知的EST标签，但近年来，小鼠全长cDNA序列的测定取得了进展，现在可以将这些EST标签序列与已报道的小鼠全长cDNA进行比较结果发现了一些候选基因，其功能可以在一定程度上被预测，并且其表达可以在大脑中得到证实。这些候选基因具有丝氨酸/苏氨酸激酶等功能，被认为有助于各种信号转导，这些基因具有与上肽连接酶、阳离子通道、钙转运酶和低分子量 GTP 结合蛋白同源的结构。。目前，我们特别关注这些候选基因1）异质GLT-1。 2)选择在KO小鼠中也显示出表达差异的基因，并使用通过电击等人为诱发惊厥性癫痫发作的小鼠和正常小鼠进行DNA微阵列，并鉴定显示出表达差异的基因并进行比较。从而表现出表达上的差异。那些匹配的被判断为由于癫痫发作本身而表达发生变化的基因，并且被认为是从本研究的目标基因中排除的分子。