プロテインキナーゼCサブタイプの活性化とターゲッティング機構の関連に関する研究

蛋白激酶C亚型激活与靶向机制关系研究

基本信息

批准号：
10169243
负责人：
斎藤尚亮
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

プロテインキナーゼC(PKC)のtranslocation(ターゲッティング)機構を解析することにより、PKC各分子種の生理的な役割について解析した。我々はGFP(Green fluorescent protein)とラット各PKC分子種(γ-,.ε-,δ-PKC)の融合蛋白質を各種培養細胞に発現させ、細胞外刺激により活性化された生細胞内のPKCの細胞内の動態の観察を行った。その結果、1)γ-,δ-,ε-PKCすべでが、G蛋白質共役型ATP受容体刺激により、20sec以内に細胞膜にtranslocationし、3min以内に元の状態に戻る(Retranslocation)。しかし、ホルボールエステル刺激によっては、すべての分子種が比較的ゆっりくりと(3-5min)ranslocationし、そのまま膜にとどまる。つまり、同一の分子種であっても、刺激により異なるターゲッティング機構を持つことが示された。2)アラキドン酸刺激により、γ-PKCは素早く細胞膜に、ε-PKCはややゆっくりとGolgi体周辺にtranslocationするのに対して、δ-PKCはtranslocationしない。つまり、同一の刺激によっても分子種によってtargeting部位(translocation)は異なることが示された。3)δ-PKCを活性化する3種の刺激(ATP,TPA,H202)は、それぞれ異なるターゲッティング機構によるものであり、細胞の機能に対する調節機構も異なると推測される。以上の結果から、PKCのターゲッティング機構は、分子種特異的、刺激特異的でありしかも時間的、空間的にも異なっていることが示され、ターゲッティング機構の解析はPKC分子種独自の機能の解明に有力な方法と考えられた。

通过分析蛋白激酶C（PKC）的易位（靶向）机理，分析了每个PKC的每个分子物种的生理作用。我们表达了各种培养细胞中GFP（绿色荧光蛋白）和大鼠PKC分子物种（γ-ε-，δ-PKC）的融合蛋白，并观察到由细胞外刺激激活的活细胞中PKC的细胞内动力学。结果，1）γ-，δ-，ε-PKC全部通过刺激G蛋白偶联的ATP受体在20秒内将其转移到细胞膜中，并在3分钟内返回其原始状态（Retranslocation）。然而，由于佛波酯刺激，所有分子物种的运行量都相对缓慢（3-5分钟），并保留在膜中。换句话说，证明即使是同一分子物种也具有不同的靶向机制，因此由于刺激而产生的靶向机制。 2）由于花生四烯酸刺激，γ-PKC迅速转移到细胞膜上，ε-PKC稍慢地易于易位，而δ-PKC则不会转运。换句话说，这表明靶向位点（易位）即使具有相同的刺激，取决于分子物种。 3）三种激活δ-PKC（ATP，TPA，H202）的刺激是由不同的靶向机制引起的，并且假定细胞功能的调节机制不同。以上结果表明，PKC的靶向机制是物种特异性的，刺激特异性的，并且在时间和空间方面有所不同，对靶向机制的分析被认为是阐明PKC分子物种独特功能的有力方法。