RNAポリメラーゼII転写伸長因子が支配する遺伝子群の動的解析
RNA聚合酶II转录延伸因子控制基因的动态分析
基本信息
- 批准号:12028201
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
- 财政年份:2000
- 资助国家:日本
- 起止时间:2000 至 2001
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
ELLやElonginに代表される転写伸長因子はRNAポリメラーゼIIの一時休止や停止を抑え、mRNA転写速度を促進する一群の蛋白分子である。本研究はELLを中心に用い、細胞内における転写伸長因子の機能的役割を明らかにすることを目的とした。まず、哺乳動物細胞において厳密な外来遺伝子の発現誘導を可能にするTcIP promoterを用い、ELL cDNAをサイトカイン依存性の造血系細胞であるBaF3細胞株に安定的に導入した。得られた安定変異細胞株においてELLを誘導的に発現させた結果、同分子は細胞増殖を抑制することが明らかとなった。同様の結果は、ELL相同分子であるELL2を用いても再現された。また、ELLと類似の転写伸長活性を有するElongin Aのアミノ酸配列情報をもとに新規ヒト分子Elongin A2をコードするcDNAを単離した。Elongin A mRNAは広い細胞種・細胞系列において構成的に発現されるのに対し、Elongin A2のmRNA発現は精巣特異的であった。さらに、組み換えElongin A2を用い、試験管内転写伸長アッセイを行った結果、同分子はRNA polymerase IIの転写伸長促進活性を有することが明らかとなった。Elongin Aの場合、その転写伸長活性は調節分子と考えられているElongin B/Cとの結合により増強されるのに対し、Elongin A2の転写伸長活性はElongin B/Cにより全く影響を受けなかった。今回樹立に成功したELL誘導発現細胞を用い、DNA chip解析を通してELL誘導前後のmRNA間において発現レベルが有意に変動する遺伝子群を同定し、細胞増殖制御とELL標的遺伝子群の関連を追求していく予定である。また、Elongin A2の組織特異的な役割ならびにその機能制御機構を検討していく予定である。
转录伸长因子(例如ELL和ELONGIN)是一组蛋白质分子,可抑制RNA聚合酶II的临时停顿和终止并促进mRNA转录速率。这项研究的重点是ELL,旨在阐明细胞内转录伸长因子的功能作用。首先,使用TCIP启动子允许严格诱导哺乳动物细胞中外源基因表达的TCIP启动子,将ELL cDNA稳定地引入了BAF3细胞系,这是一种细胞因子依赖性造血细胞。由于ELL在所得稳定的突变细胞系中的诱导表达,因此发现该分子抑制细胞增殖。也使用ELL 2(ELL同源分子ELL2)再现了相似的结果。此外,基于Elongin A的氨基酸序列信息分离了编码新型人分子元分子A2的cDNA,该氨基酸序列的转录力素活性与ELL相似。元素蛋白A mRNA在多种细胞类型和细胞系中组成性表达,而元素蛋白A2 mRNA表达是特异性的。此外,使用重组元素A2进行体外转录伸长测定法,并揭示该分子具有促进RNA聚合酶II的转录伸长的活性。在元素A的情况下,通过与源泉蛋白B/C的结合来增强其转录伸长活性,该活性被认为是一种调节性分子,而源源不断A2的转录元素活性根本不受源角B/C的影响。使用已成功建立的ELL诱导细胞,我们将通过DNA芯片分析前后鉴定具有在ELL诱导前后mRNA之间显着变化的基因组,我们将追求细胞增殖控制与ELL靶基因组之间的关系。我们还将考虑元素蛋白A2及其功能控制机制的组织特异性作用。
项目成果
期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Hatakeyama.M: "Identification and Characterization of Elongin A2, a new member of the elongin family of transcription elongation factors, specifically expressed in the testis."The journal of biological chemistry. 275. 6546-6552 (2000)
Hatakeyama.M:“Elongin A2 的鉴定和表征,Elongin A2 是转录延伸因子 elongin 家族的新成员,在睾丸中特异性表达。”生物化学杂志。
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
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- 通讯作者:
Hatakeyama.M: "β 3-endonexin as a novel inhibitor of cyclin A-asssociated kinase."Biochemical and biophysical research communications. 267. 947-952 (2000)
Hatakeyama.M:“β 3-内毒素作为细胞周期蛋白 A 相关激酶的新型抑制剂。”生物化学和生物物理研究通讯。 267. 947-952 (2000)
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Hatakeyama.M: "Ras and STAT are essential and sufficient downstream components of JAKs in cell proliferation"Japanese Journal of Cancer Research. 93. 527-533 (2000)
Hatakeyama.M:“Ras 和 STAT 是 JAK 在细胞增殖中必需且充分的下游成分”,《日本癌症研究杂志》。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Hatakeyama.M: "Collective Inhibition of pRB Family Proteins by Phosphorylation in Cells with p16^<INK4a> Loss or Cyclin E 0verexpression."The journal of biological chemistry. (in press). (2001)
Hatakeyama.M:“p16^<INK4a> 丢失或细胞周期蛋白 E 0 过度表达的细胞中磷酸化对 pRB 家族蛋白的集体抑制。”生物化学杂志。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Hatakeyama.M: "Human p55CDC/Cdc20 associates with cyclin A and is phosphorylated by cyclin A-Cdk2 complex."Biochemical and biophysical research communications. 268. 530-534 (2000)
Hatakeyama.M:“人类 p55CDC/Cdc20 与细胞周期蛋白 A 结合,并被细胞周期蛋白 A-Cdk2 复合物磷酸化。”生物化学和生物物理研究通讯。
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