RNAポリメラーゼII転写伸長因子が支配する遺伝子群の動的解析

RNA聚合酶II转录延伸因子控制基因的动态分析

• 批准号: 12028201
• 负责人: 畠山 昌則
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028201/
• 关键词: 転写伸長因子; ELL; elonginA; elonginA2; p53; テトラサイクリン制御性プロモーター; テクトースオペロン; 外来遺伝子発現誘導系

ELLやElonginに代表される転写伸長因子はRNAポリメラーゼIIの一時休止や停止を抑え、mRNA転写速度を促進する一群の蛋白分子である。本研究はELLを中心に用い、細胞内における転写伸長因子の機能的役割を明らかにすることを目的とした。まず、哺乳動物細胞において厳密な外来遺伝子の発現誘導を可能にするTcIP promoterを用い、ELL cDNAをサイトカイン依存性の造血系細胞であるBaF3細胞株に安定的に導入した。得られた安定変異細胞株においてELLを誘導的に発現させた結果、同分子は細胞増殖を抑制することが明らかとなった。同様の結果は、ELL相同分子であるELL2を用いても再現された。また、ELLと類似の転写伸長活性を有するElongin Aのアミノ酸配列情報をもとに新規ヒト分子Elongin A2をコードするcDNAを単離した。Elongin A mRNAは広い細胞種・細胞系列において構成的に発現されるのに対し、Elongin A2のmRNA発現は精巣特異的であった。さらに、組み換えElongin A2を用い、試験管内転写伸長アッセイを行った結果、同分子はRNA polymerase IIの転写伸長促進活性を有することが明らかとなった。Elongin Aの場合、その転写伸長活性は調節分子と考えられているElongin B/Cとの結合により増強されるのに対し、Elongin A2の転写伸長活性はElongin B/Cにより全く影響を受けなかった。今回樹立に成功したELL誘導発現細胞を用い、DNA chip解析を通してELL誘導前後のmRNA間において発現レベルが有意に変動する遺伝子群を同定し、細胞増殖制御とELL標的遺伝子群の関連を追求していく予定である。また、Elongin A2の組織特異的な役割ならびにその機能制御機構を検討していく予定である。

以ELL和Elongin为代表的转录延伸因子是一组抑制RNA聚合酶II暂停和终止、促进mRNA转录速率的蛋白质分子。本研究的目的是阐明转录延伸因子在细胞中的功能作用，主要利用ELL。首先，使用 TcIP 启动子将 ELL cDNA 稳定引入 BaF3 细胞系（一种细胞因子依赖性造血细胞系），从而可以在哺乳动物细胞中严格诱导外源基因表达。作为在获得的稳定突变细胞系中诱导表达ELL的结果，表明该分子抑制细胞增殖。使用 ELL 同源物 ELL2 也重现了类似的结果。此外，根据具有与ELL相似的转录延伸活性的Elongin A的氨基酸序列信息，我们分离了编码新的人类分子Elongin A2的cDNA。 Elongin A mRNA 在多种细胞类型和细胞谱系中组成型表达，而 Elongin A2 mRNA 表达具有睾丸特异性。此外，使用重组Elongin A2进行体外转录延伸测定的结果表明，该分子具有RNA聚合酶II的转录延伸促进活性。就Elongin A而言，其转录延伸活性通过与被认为是调节分子的Elongin B/C结合而增强，而Elongin A2的转录延伸活性完全不受Elongin B/C的影响。利用我们已成功建立的ELL诱导表达细胞，我们将通过DNA芯片分析来识别ELL诱导前后mRNA表达水平发生显着变化的基因组，并探究细胞增殖控制与ELL靶基因之间的关系。我正计划去。我们还计划研究Elongin A2的组织特异性作用及其功能控制机制。

项目成果

Hatakeyama.M: "Identification and Characterization of Elongin A2, a new member of the elongin family of transcription elongation factors, specifically expressed in the testis."The journal of biological chemistry. 275. 6546-6552 (2000)

Hatakeyama.M：“Elongin A2 的鉴定和表征，Elongin A2 是转录延伸因子 elongin 家族的新成员，在睾丸中特异性表达。”生物化学杂志。

Hatakeyama.M: "β 3-endonexin as a novel inhibitor of cyclin A-asssociated kinase."Biochemical and biophysical research communications. 267. 947-952 (2000)

Hatakeyama.M：“β 3-内毒素作为细胞周期蛋白 A 相关激酶的新型抑制剂。”生物化学和生物物理研究通讯。 267. 947-952 (2000)

Hatakeyama.M: "Ras and STAT are essential and sufficient downstream components of JAKs in cell proliferation"Japanese Journal of Cancer Research. 93. 527-533 (2000)

Hatakeyama.M：“Ras 和 STAT 是 JAK 在细胞增殖中必需且充分的下游成分”，《日本癌症研究杂志》。

Hatakeyama.M: "Collective Inhibition of pRB Family Proteins by Phosphorylation in Cells with p16^<INK4a> Loss or Cyclin E 0verexpression."The journal of biological chemistry. (in press). (2001)

Hatakeyama.M：“p16^<INK4a> 丢失或细胞周期蛋白 E 0 过度表达的细胞中磷酸化对 pRB 家族蛋白的集体抑制。”生物化学杂志。

Hatakeyama.M: "Human p55CDC/Cdc20 associates with cyclin A and is phosphorylated by cyclin A-Cdk2 complex."Biochemical and biophysical research communications. 268. 530-534 (2000)

Hatakeyama.M：“人类 p55CDC/Cdc20 与细胞周期蛋白 A 结合，并被细胞周期蛋白 A-Cdk2 复合物磷酸化。”生物化学和生物物理研究通讯。