細胞周期におけるレチノブラストーマタンパクの機能制御

细胞周期中视网膜母细胞瘤蛋白的功能调节

• 批准号: 07272239
• 负责人: 畠山 昌則
• 金额: $ 19.01万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272239/
• 关键词: レチノブラストーマタンパク; p130; E2F; 細胞周期; サイトカイン; 癌抑制遺伝子; 細胞増殖; レチノブラストーマ(RB)遺伝子; リン酸化; サイクリン; サイクリン依存性キナーゼ; 酵母

1。造血系細胞における厳密な外来遺伝子の発現抑制を可能にする系を用いてヒトpRBcDNAをサイトカイン依存性リンパ球細胞株を、Ba/F3に導入し、誘導時において非誘導時の50倍程度のpRB蛋白蓄積をしめす安定変異株複数樹立した。これら細胞の細胞周期進行過程、細胞増殖曲線等を検討した結果、pRB非誘導・誘導における有意な増殖能変化は認められなかった。2。pRBはリン酸化を受けて不活化されるため、次にサイクリン-CDKの標的となりうる18個のセリン、スレオニン残基をアラニンに置換した人工改変pRB分子を作製した。この人工改変pRB分子をBa/F3細胞株に導入し細胞増殖に及ぼす効果を検討したところ、わずかな細胞増殖抑制が認められるのみで、細胞周期は停止することなく進行した。3。上記発現誘導系を用いて、pRB関連分子をBa/F3細胞株に導入し蛋白誘導を行なったところp130を導入発現することによりきわめて強力な細胞増殖抑制活性が認められた。4。その活性がp130により抑制されることが知られているE2F4をBa/F3細胞株に導入し蛋白誘導を行なった。その結果、E2F4を構成的に発現させることにより、Ba/F3細胞のサイトカイン依存性が消失し、細胞は増殖因子非依存的増殖応答能を獲得した。本研究から、これまですべての体細胞増殖におけるブレーキ分子として細胞周期制御に普遍的に関与すると考えられてきたpRBがサイトカイン依存性の造血系細胞増殖制御に際してきわめて限定的な役割しか担っていないことが明らかになった。本研究はpRB不応答性細胞の存在を示した最初の報告である。さらに、この細胞の増殖はpRB関連分子のひとつであるp130により強力に抑制された。この事実はある種の血球系細胞において、pRBではなくp130を負の制御因子として有する細胞周期制御機構の存在を示している。この結論は、p130の標的分子と考えられているE2F4の異所性発現によりBa/F3細胞が増殖因子非依存性増殖能を獲得することからも強く支持された。

1。使用允许严格抑制造血细胞中外源基因表达的系统，将人PRB cDNA引入BA/F3中，并建立了多个稳定的突变体，显示出PRB蛋白的积累约50倍，约50倍。由于检查了这些细胞的细胞周期进程过程和细胞增殖曲线，当未诱导或诱导PRB时，未观察到增殖能力的显着变化。 2。由于PRB被磷酸化并灭活，因此创建了一个人为修饰的PRB分子，其中18种丝氨酸和苏氨酸残基可以用Cyclin-CDK靶向，被丙氨酸取代。当我们研究了将这种人为修饰的PRB分子引入BA/F3细胞系对细胞增殖的影响时，仅观察到细胞增殖的抑制作用，并且细胞周期在没有停滞的情况下进行。 3。使用上述表达诱导剂系统，将与PRB相关的分子引入BA/F3细胞系中以诱导蛋白质，并引入和表达P130，从而导致非常有效的细胞增殖抑制活性。 4。E2F4被P130抑制，引入了BA/F3细胞系以诱导蛋白质。结果，E2F4的本构表达导致BA/F3细胞的细胞因子依赖性，并且细胞获得了无关生长因子的增殖反应潜力。这项研究表明，被认为在所有体细胞增殖中普遍参与细胞周期控制中的PRB在细胞周期中的控制中仅在细胞因子依赖性造血细胞增殖中起着非常有限的作用。这项研究是第一个显示存在响应性细胞的报告。此外，P130是与PRB相关的分子之一P130强烈抑制该细胞的增殖。这一事实表明，在某些血细胞系中存在细胞周期调节机制，其中P130是负调节剂而不是PRB。 E2F4的异位表达也得到了强烈支持，E2F4被认为是P130的靶标分子，Ba/f3细胞获得了与生长因子无关的增殖潜力。

项目成果

畠山昌則: "分子腫瘍学" 佐藤昇志、菊地浩吉, 487 (1996)

Masanori Hatakeyama：“分子肿瘤学” Shoshi Sato，Kokichi Kikuchi，487（1996）

HATAKEYAMA,M: "The cancer cell and the cell cycle." Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biol.59. 1-10 (1995)

HATAKEYAMA，M：“癌细胞和细胞周期。”

畠山 昌則: "RB癌抑制遺伝子産物-その上流と下流" 実験医学(増刊). Vol.15 No.16. 86-91 (1997)

Masanori Hatakeyama：“RB肿瘤抑制基因产物-其上游和下游”实验医学（特刊）第15卷第16期（1997年）。

前田達哉、畠山昌則: "RB癌抑制遺伝子と細胞周期" 血液・腫瘍科. (印刷中).

Tatsuya Maeda，Masanori Hatakeyama：“RB 肿瘤抑制基因和细胞周期”，血液学和肿瘤学系（正在出版）。

前田達哉, 畠山昌則: "RB癌抑制遺伝子と細胞周期" 血液・腫瘍科. 第34巻第4号. 271-277 (1997)

Tatsuya Maeda，Masanori Hatakeyama：“RB 肿瘤抑制基因和细胞周期”，血液学和肿瘤学系，第 34 卷，第 4 期。271-277 (1997)