細胞周期におけるレチノブラストーマタンパクの機能制御

细胞周期中视网膜母细胞瘤蛋白的功能调节

• 批准号: 07272239
• 负责人: 畠山 昌則
• 金额: $ 19.01万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07272239/
• 关键词: レチノブラストーマタンパク; p130; E2F; 細胞周期; サイトカイン; 癌抑制遺伝子; 細胞増殖; レチノブラストーマ(RB)遺伝子; リン酸化; サイクリン; サイクリン依存性キナーゼ; 酵母

1。造血系細胞における厳密な外来遺伝子の発現抑制を可能にする系を用いてヒトpRBcDNAをサイトカイン依存性リンパ球細胞株を、Ba/F3に導入し、誘導時において非誘導時の50倍程度のpRB蛋白蓄積をしめす安定変異株複数樹立した。これら細胞の細胞周期進行過程、細胞増殖曲線等を検討した結果、pRB非誘導・誘導における有意な増殖能変化は認められなかった。2。pRBはリン酸化を受けて不活化されるため、次にサイクリン-CDKの標的となりうる18個のセリン、スレオニン残基をアラニンに置換した人工改変pRB分子を作製した。この人工改変pRB分子をBa/F3細胞株に導入し細胞増殖に及ぼす効果を検討したところ、わずかな細胞増殖抑制が認められるのみで、細胞周期は停止することなく進行した。3。上記発現誘導系を用いて、pRB関連分子をBa/F3細胞株に導入し蛋白誘導を行なったところp130を導入発現することによりきわめて強力な細胞増殖抑制活性が認められた。4。その活性がp130により抑制されることが知られているE2F4をBa/F3細胞株に導入し蛋白誘導を行なった。その結果、E2F4を構成的に発現させることにより、Ba/F3細胞のサイトカイン依存性が消失し、細胞は増殖因子非依存的増殖応答能を獲得した。本研究から、これまですべての体細胞増殖におけるブレーキ分子として細胞周期制御に普遍的に関与すると考えられてきたpRBがサイトカイン依存性の造血系細胞増殖制御に際してきわめて限定的な役割しか担っていないことが明らかになった。本研究はpRB不応答性細胞の存在を示した最初の報告である。さらに、この細胞の増殖はpRB関連分子のひとつであるp130により強力に抑制された。この事実はある種の血球系細胞において、pRBではなくp130を負の制御因子として有する細胞周期制御機構の存在を示している。この結論は、p130の標的分子と考えられているE2F4の異所性発現によりBa/F3細胞が増殖因子非依存性増殖能を獲得することからも強く支持された。

1.使用允许严格抑制造血细胞中外源基因表达的系统，将人pRB cDNA导入细胞因子依赖性淋巴细胞系Ba/F3中，诱导期间pRB的丰度比未诱导时高约50倍。建立了表现出蛋白质积累的突变株。检查这些细胞的细胞周期进展过程、细胞生长曲线等的结果是，在pRB非诱导/诱导中没有观察到增殖能力的显着变化。 2.由于 pRB 通过磷酸化而失活，我们接下来创建了一种人工修饰的 pRB 分子，其中 18 个丝氨酸和苏氨酸残基（可以作为细胞周期蛋白-CDK 的靶标）被丙氨酸取代。当将这种人工修饰的pRB分子引入Ba/F3细胞系并检查其对细胞增殖的影响时，仅观察到对细胞增殖的轻微抑制，并且细胞周期继续进行而没有停滞。 3.使用上述表达诱导系统，将pRB相关分子引入Ba/F3细胞系中进行蛋白诱导，通过引入并表达p130观察到极强的细胞生长抑制活性。 4. E2F4 的活性已知会被 p130 抑制，将其引入 Ba/F3 细胞系中以诱导蛋白质诱导。结果，通过组成型表达E2F4，Ba/F3细胞的细胞因子依赖性消失，并且细胞获得了响应不依赖于生长因子的增殖的能力。这项研究表明，以前被认为作为所有体细胞增殖的制动分子普遍参与细胞周期控制的pRB，在控制细胞因子依赖性造血细胞增殖中发挥的作用极其有限。这项研究是第一份显示 pRB 无反应细胞存在的报告。此外，这些细胞的增殖被 p130（一种 pRB 相关分子）强烈抑制。这一事实表明存在一种细胞周期控制机制，该机制以 p130（而不是 pRB）作为某些血细胞的负调节因子。 Ba/F3细胞通过E2F4的异位表达获得了不依赖于生长因子的增殖能力，这一事实有力地支持了这一结论，E2F4被认为是p130的靶分子。

项目成果

畠山昌則: "分子腫瘍学" 佐藤昇志、菊地浩吉, 487 (1996)

Masanori Hatakeyama：“分子肿瘤学” Shoshi Sato，Kokichi Kikuchi，487（1996）

HATAKEYAMA,M: "The cancer cell and the cell cycle." Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biol.59. 1-10 (1995)

HATAKEYAMA，M：“癌细胞和细胞周期。”

畠山 昌則: "RB癌抑制遺伝子産物-その上流と下流" 実験医学(増刊). Vol.15 No.16. 86-91 (1997)

Masanori Hatakeyama：“RB肿瘤抑制基因产物-其上游和下游”实验医学（特刊）第15卷第16期（1997年）。

前田達哉、畠山昌則: "RB癌抑制遺伝子と細胞周期" 血液・腫瘍科. (印刷中).

Tatsuya Maeda，Masanori Hatakeyama：“RB 肿瘤抑制基因和细胞周期”，血液学和肿瘤学系（正在出版）。

前田達哉, 畠山昌則: "RB癌抑制遺伝子と細胞周期" 血液・腫瘍科. 第34巻第4号. 271-277 (1997)

Tatsuya Maeda，Masanori Hatakeyama：“RB 肿瘤抑制基因和细胞周期”，血液学和肿瘤学系，第 34 卷，第 4 期。271-277 (1997)