終末分化した心筋細胞の機能維持機構の解析

终末分化心肌细胞功能维持机制分析

基本信息

批准号：
11877113
负责人：
徳久剛史
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877113/
关键词：
BCL6 BAZF ノックアウトマウス転写抑制アポトーシス心筋細胞

项目摘要

本研究は、BCL6ノックアウト(KO)マウスにみられた心筋細胞死の誘導機序をBCL6の標的遺伝子の解析を含めた分子のレベルで解明したり、BAZF-KOマウスを作製してその心筋細胞における機能を解明することにより、終末分化した心筋細胞の機能維持機構を明らかにすることを目的とした。そして、以下の点について明らかにした。1)BCL6の転写抑制機序の解析:BCL6とそのファミリー遺伝子であるBAZFの転写抑制活性に重要な部分(17アミノ酸)を明らかにした。そこで、BCL6による転写抑制機序を解析した。その結果、17アミノ酸部のみで転写制御活性を見いだし、この抑制活性がHistone deacethylase(HDAC)の阻害剤であるTSA(Trichostatin A)により完全に消失することを見出した。2)BCL6の強発現による細胞死誘導機序の解析:BCL6を構成する17アミノ酸部とDNA結合ドメインをコードする遺伝子の培養細胞への強発現によりアポトーシスが誘導され、かつBCL6から17アミノ酸部分を取り除いた遺伝子の強発現では、アポトーシスは起こらなかったことから、BCL6はこの17アミノ酸の部分を介してアポトーシスを誘導していることが示唆された。また、このアポトーシスは培養系にHDACの阻害剤であるTSAを添加しておくと起こらなくなることから、BCL6がこの17アミノ酸部分を介してHDAC複合体の染色体DNAへのリクルートを介して細胞死が誘導されることを明らかにした。3)BAZF-KOマウスの作製とその心筋細胞における機能を解明:ES細胞への遺伝子ターゲッティングは成功しており、キメラマウスを作製中である。

这项研究旨在阐明分子水平的BCL6敲除（KO）小鼠中心肌细胞死亡的机制，包括分析BCl6的靶基因，并通过产生BAZF-KO小鼠的终末分化心肌细胞的功能，并阐明其在心脏手pymy骨中的功能。还阐明了以下几点：1）分析Bcl6转录抑制的机理：我们揭示了一个（17个氨基酸）对于Bcl6及其家族基因BAZF的转录抑制活性很重要。因此，分析了由BCl6引起的转录抑制的机制。结果，仅在17个氨基酸部分发现转录控制活性，发现这种抑制活性被TSA（Trichostatin A）完全消除，这是一种组蛋白脱乙酰乙基酶（HDAC）的抑制剂。 2）通过强烈表达BCl6：凋亡的强烈表达来分析细胞死亡诱导的机制，该基因的强烈表达编码了培养细胞中Bcl6的17个氨基酸部分和DNA结合结构域的凋亡，并且当通过将BCL酸的17氨基酸部分解除后，并未发生凋亡，并没有发生强烈的表达。此外，当将HDAC的抑制剂TSA添加到培养系统中时，这种凋亡不会发生，并且发现通过这17个氨基酸部分将BCL6募集到HDAC复合物的染色体DNA中诱导细胞死亡。 3）BAZF-KO小鼠的产生及其在心肌细胞中的功能：靶向ES细胞的基因已成功，目前正在产生嵌合小鼠。