核内受容体の細胞質・核間輸送および発癌性からみた内分泌攪乱メカニズムの解析

从核受体胞质/核转运及致癌性角度分析内分泌干扰机制

• 批准号: 13027291
• 负责人: 川尻 要
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Research Institute for Clinical Oncology, Saitama Cancer Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027291/
• 关键词: 内分泌撹乱物質; TCDD; AhR; ARNT; CYP1A1; 核移行; 核外輸送; DNAチップ

1.生殖腺形成に関与する転写因子の細胞質・核間輸送の調節機構の解析ダイオキシンの複合的な生物機能への影響を解析するために、性分化関連因子でありステロイドホルモン合成を調節するSF-1とその抑制作用を示すDax-1の細胞内での相互作用について検討した。その結果、Dax-1はSF-1と結合してSF-1のNLSを利用して核に移行すること、SF-1との結合にはDax-1の最もN端に近いNR box 1が関与すること、これらの複合体の核への移行にはC端に存在しているAF2ドメインも重要であること、AF2ドメインに変異のある先天性副腎低形成(AHC)患者のDAX-1はSF-1依存的な核移行活性が非常に低下していることが示された。従って、正常なDAX-1の細胞内局在性が変異により乱されることにより遺伝性疾患AHCの原因の一部になることが示唆された。2.DESの発がんに関与する標的遺伝子の同定内分泌攪乱物質の影響の受け方には、個人差があり遺伝的背景が関与していると思われる。この仮説をラットを用いQTL(quatntitative trait loci)分析により証明することを試みた。まずF344とLong Evansの交配により、32系列のrecombinant inbred(RI)ラットを作成しマイクロサテライトマーカーを用いたPCR法によりstrain distribution pattern(SPD)表を作成した。ついで内分泌攪乱物質のひとつである非ステロイド系エストロゲン作用物質diethlystillbestrol(DES)約17mgをポリスチレンチューブに封入し、生後4週間の雄性ラットの皮下にうめこんだ。8週間後に、睾丸重量を測定した。重量は各RI系で異なり、Map Managerソフトを用いQTL解析したところ、ラット第7染色体に連鎖することがわかった。すなわちDESによる睾丸委縮の程度には連鎖座位付近の遺伝子の多型が関与していることが示唆された。

1。分析涉及性腺形成的转录因子的细胞质和核核转运的调节机制，以分析二恶英对复杂生物学功能的影响，我们研究了SF-1的细胞内相互作用，SF-1的细胞内相互作用，一种与性别分化有关的因子和类固醇激素的合成和DAX-1，以及表现出其构成效应。 The results showed that Dax-1 binds to SF-1 and translocates to the nucleus using the NLS of SF-1, that NR box 1, the closest N-terminus of Dax-1 is involved in binding to SF-1, that the AF2 domain present at the C-terminus is also important for translocating these complexes to the nucleus, and that DAX-1 in patients with congenital hypoadrenal (AHC) mutations in the AF2 domain SF-1依赖性核转运活性非常差。因此，有人提出，正常DAX-1的亚细胞定位被突变破坏，导致遗传性疾病AHC的部分原因。 2。鉴定涉及DES的癌基因的靶基因，人们认为内分泌干扰物的影响因人而异，并且涉及遗传背景。我们试图通过大鼠中的QTL（qutntitative性状基因座）分析来证明这一假设。首先，通过交配F344和Long Evans制备了32个重组亲（RI）大鼠，并使用微卫星标记通过PCR制备应变分布模式（SPD）表。然后，将约17 mg的非甾体雌激素剂Diethlystillbestrol（DES）（DES）（内分泌干扰物之一）封装在聚苯乙烯管中，并将其倒入4周大的雄性大鼠的皮下位置。 8周后，测量睾丸重量。每个RI系统的权重都不同，使用MAP Manager软件的QTL分析显示，它与大鼠染色体7相关。换句话说，建议链接基因座附近基因中的多态性与DES引起的睾丸萎缩有关。