培養細胞系を用いたWnt/Winglessシグナル伝達経路の生化学的解析

使用培养细胞系对 Wnt/Wingless 信号通路进行生化分析

基本信息

批准号：
10171216
负责人：
柳川伸一
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10171216/
关键词：
Wnt Wingless シグナル伝達発生

项目摘要

Wnt/Wingless(Wg)内情報伝達経路について、その生化学的解析に理想的なDrosophila翅原基由来細胞clone-8を用いた培養細胞系を確立し、この系を用いて、Wg経路で生じる生化学的変化につき解析した。1) Wnt/Wgシグナル伝達におけるマウス及びDrosophila Axin分子の機能に関する比較解析Axinはβカテニン、GSK3-βそして癌抑制遺伝子産物APCをともに直接結合するドッキング蛋白質であり、GSK3-βによるβカテニンの特異的リン酸化を著しく促進する事によって、βカテニン蛋白量を負に調節していると考えられている。このAxinはβカテニンの負の制御因子であるとの報告に対し、我々はDrosophilaのSchneider S2細胞内でマウスAxin蛋白質を強制発現すると、著しいArmの蓄積が誘導されることを見いだした。この効果の分子機構を解析した結果、マウスAxin蛋白質の過剰発現により、S2細胞内で、マウスAxin,ZW3からなる複合体が多く形成される為に、Armの分解を促進する機能を備えたDrosophia Axin,ZW3,Armの三者を含む複合体の形成が阻害され、Arm蛋白の蓄積が生じると考えられた。2) マウスDishevelled,Dvl-1,Dvl-2のWnt/Wgシグナル伝達経路における生化学的機能の解明マウスNIH3T3,L,C57MG細胞を可溶性Wnt-3A蛋白で3時間処理すると、βカテニン蛋白の著しい細胞質内蓄積が観察され、さらにそれと同時にDvl-1,2分子のSer/Thrリン酸化の亢進が生じた。ここに始めてDshと同様に、DvlもWnt刺激によりリン酸化を受け、活性化されることが確認された。

我们使用果蝇翼原基衍生的细胞克隆 8 建立了培养细胞系统，该系统非常适合分析 Wnt/Wingless (Wg) 内部信号转导通路的生化变化。 1）小鼠和果蝇Axin分子在Wnt/Wg信号转导中的功能对比分析 Axin是直接结合β-catenin、GSK3-β以及抑癌基因产物APC的对接蛋白，β-catenin的特异性GSK3-β 据认为，β-连环蛋白蛋白水平通过显着促进 β-连环蛋白的磷酸化而受到负调节。针对 Axin 是 β-catenin 负调节因子的报道，我们发现在果蝇 Schneider S2 细胞中强制表达小鼠 Axin 蛋白会诱导 Arm 的显着积累。分析该效应的分子机制的结果是，小鼠Axin蛋白的过度表达导致S2细胞内形成许多由小鼠Axin和ZW3组成的复合物，导致果蝇具有促进Arm解体的功能。含有 Axin、ZW3 和 Arm 的复合物的形成受到抑制，导致 Arm 蛋白的积累。 2) 阐明小鼠 Dishevelled、Dvl-1、Dvl-2 在 Wnt/Wg 信号通路中的生化功能当小鼠 NIH3T3,L,C57MG 细胞用可溶性 Wnt-3A 蛋白处理 3 小时时，有显着的变化。观察到 β-catenin 蛋白的细胞质积累增加，同时 Dvl-1,2 分子的 Ser/Thr 磷酸化增加。现在首次证实，与Dsh一样，Dvl也被Wnt刺激磷酸化和激活。