WntシグナルによるArmadillo/βカテニン蛋白の分解制御機構の解析

Wnt信号控制犰狳/β-catenin蛋白降解的机制分析

基本信息

批准号：
11144219
负责人：
柳川伸一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11144219/
关键词：
Wnt シグナル伝達 Armadillo β-カテニンプロテアソーム

项目摘要

Wnt/Wingless(Wg)シグナル伝達経路の主要な構成員は、Scaffold蛋白であるAxinに結合して大きな複合体を形成し、β-カテニン/Am(Arm)蛋白質の分解制御装置として機能している。マウスとDrosophilaのAxinのアミノ酸配列を比較すると、癌抑制遺伝子産物APCを結合するRGSドメインとC-末端のDIXドメイン以外には、非常に高い相同性は認められない。そこで様々のDaxinの欠損変異体を、Wgに感受性を持つDrosophila培養細胞S2R+に導入し、そのWgシグナル伝達に対する効果を検討した。細胞内Armレベルへの影響、シグナル伝達経路の主要な構成員との結合性、並びにTcf依存性転写活性化を指標として各変異体の機能を解析した結果、1)Arm及びZw3と分子中央部で、またC-末端部でDishevclled(Dsh)及びProtein phosphatase 2Aと結合する事、2)Wgシグナル伝達の阻害には、N-末端からArm結合部位で十分であり、またC-末端部だけからなる変異体はDominant-negativeとなりArm蓄積を誘導する事、3)細胞内でのDshとDaxinのco-localizationが認められる事、4)Wg刺激によりDaxinは低リン酸化型となる事、5)DaxinはWg,Dsh,全長ArmによるTcf依存性転写活性化を阻害出来るが、N-末端にあるリン酸化標的配列を欠いたArmによる転写活性化は阻害出来ない事が明らかとなった。6)またキナーゼ活性を欠くZw3もDaxinと結合する事から、このZw3変異体が持つ強いArm誘導活性の分子機構が明らかとなった。

Wnt/Wingless（WG）信号通路的主要成员与Axin的支架蛋白结合，形成大型复合物，并作为β-catenin/AM（AM）蛋白质降解的调节剂的作用。比较小鼠和果蝇轴的氨基酸序列，除了结合肿瘤抑制基因产物APC和C末端DIX域的RGS结构域外，没有其他很高的同源性。因此，将各种Daxin缺陷型突变体引入了S2R+，这是一种对WG敏感的果蝇培养的细胞，研究了其对WG信号的影响。使用指标和TCF依赖性转录激活分析了对细胞内臂水平，与信号通路主要成员的结合以及每个突变体的功能的影响。 1）在臂和ZW3的中央和C端端处的DISEVCLLED（DSH）和蛋白质磷酸酶。 It was revealed that it binds to 2A, 2) the Arm binding site from the N-terminus is sufficient for inhibiting Wg signaling, and that mutants consisting only at the C-terminus become Dominant-negative and induce Arm accumulation, 3) co-localization of Dsh and Daxin is observed in the cell, 4) Daxin becomes a hypophosphorylated form upon Wg stimulation, and 5) Daxin can inhibit WG，DSH和全长臂的TCF依赖性转录激活，但不能抑制ARM的转录激活，该ARM缺乏N末端处的磷酸化靶序序。 6）此外，缺乏激酶活性的ZW3也与Daxin结合，揭示了该ZW3突变体强臂诱导活性的分子机制。