DNA障害に伴う核内クロストーク及び遺伝子発現の分子機序を基盤にした治療法の開発

基于与 DNA 疾病相关的核串扰和基因表达的分子机制开发治疗方法

基本信息

批准号：
10153267
负责人：
河野公俊
金额：
$ 2.88万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10153267/
关键词：
YB-1 PCNA P-gp NF-Y p53 AP-2 MOAT

项目摘要

我々はこれまで、シスプラチン感受性を左右する転写因子としてYB-1を報告してきた。このYB-1に関して更に解析を進め、その分子機序としてDNA修復との関連を検討した。YB-1のcDNAを用いて大腸菌での発現を行い、プルダウンアッセイを行った。その結果YB-1がPCNAと直接結合することを見いだし、in vivoにおいても結合が確認された。このことはDNA修復にYB-1が関与していることを示す。またYB-1はDNA結合能を持つことから、DNA損傷を認識するか否かをゲルシフトアッセイにて解析した所、YB-1による修復関連蛋白をリクルートする可能性が示唆された。また臨床腫瘍におけるYB-1の発現とその標的遺伝子の発現の相関についても検討し、骨肉腫においてはYB-1の核内発現とP-gpの発現が相関すること2)、しかし大腸癌や甲状腺癌においては正常部より癌部で発現が高かった。しかしP-gp発現との相関はなかったものの、TopoIIαやPCNAとの発現には正の相関があり増殖マーカーとしての有用性が示された。シスプラチン耐性での耐性関連遺伝子として新たにABCトランスポータースーパーファミリーのcMOAT2/MRP3の全長cDNAを単離して報告した。現在ディファレンシャルハイプリダイゼーション法にて新たに3クローンを分離して解析を進めている。薬剤ストレス応答もしくはDNA損傷により誘導される遺伝子についてはその解析を終えつつあり中心的役割を果たす転写遺伝子について最終的な同定作業を進めている。候補としてNF-Y、CTF、AP-2、p53等が挙げられ、更にそれらのリン酸化やアセチル化が関与する可能性が高いと考えられる。シスプラチン耐性細胞で過剰発現している遺伝子群のプロモーター解析の結果については現在論文準備中である。

我们之前报道过 YB-1 作为影响顺铂敏感性的转录因子。我们进一步分析了YB-1并研究了其与DNA修复相关的分子机制。使用YB-1 cDNA在大肠杆菌中进行表达，并进行pull-down测定。结果发现YB-1直接与PCNA结合，并且在体内也证实了结合。这表明YB-1参与DNA修复。此外，由于 YB-1 具有结合 DNA 的能力，因此通过凝胶迁移分析确定其是否识别 DNA 损伤表明 YB-1 可能会募集修复相关蛋白。我们还研究了临床肿瘤中YB-1表达与其靶基因表达的相关性，发现在骨肉瘤中YB-1的核表达和P-gp表达具有相关性2)，但在结直肠癌和甲状腺癌中，癌变区域的表达量高于正常区域。然而，尽管与P-gp表达没有相关性，但与TopoIIα和PCNA表达呈正相关，表明其作为增殖标志物的有用性。我们分离并报道了ABC转运蛋白超家族的新成员cMOAT2/MRP3的全长cDNA，作为顺铂耐药的耐药相关基因。目前，已利用差异杂交方法分离出三个新克隆并正在进行分析。我们正在完成对药物应激反应或DNA损伤诱导的基因的分析，并正在进行最终鉴定发挥核心作用的转录基因。候选者包括NF-Y、CTF、AP-2、p53等，它们的磷酸化和乙酰化很可能参与其中。我们目前正在准备一篇关于顺铂耐药细胞中过表达基因的启动子分析结果的论文。