抗癌剤の分子標的としての転写関連蛋白の発現機能解析と新治療法の開発

作为抗癌药物分子靶标的转录相关蛋白表达的功能分析和新治疗方法的开发

基本信息

批准号：
09255262
负责人：
河野公俊
金额：
$ 3.2万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09255262/
关键词：
抗癌剤早期応答ストレスシグナル伝達 YB-1 DNA損傷転写因子

项目摘要

抗癌剤による癌細胞の示す早期応答ストレスのシグナル伝達と最終標的である転写因子に着目し、その発現や機能解析を基盤にして新しい癌治療法を考案することを目的として、今年度は我々の同定した分子標的として転写因子であるYB-1を中心に解析をすすめた。一方、抗癌剤、特にDNA損傷により誘導される遺伝子の同定とその制御領域の単離をすすめ、新しい分子標的のを転写因子を中心にすすめ、転写因子の制御からみた新しい治療法の考案を目指している。今年度の成果として、1.YB-1遺伝子のゲノム構造を明らかにし、特徴的な核酸結合領域であるCold Shock Domainのエキソン構造から、この遺伝子の進化的考察を行った。2.YB-1の蛋白の細胞内局在とGFPとのフュージョン蛋白の発現によりストレス応答による核内移行の機序の存在を明らかにした。またこの移行にはリン酸化が関与することが判明した。3.ストレス応答によるMDRIの発現上昇がYB-1の核内移行とカップルすることを、レポーターを導入した細胞株にアンチセンスを発現することより証明した。4.MDRIプロモーターの発現にはYB-1の結合のみならず給合部位近傍のメチル化の状態が関与することをMDR1遭伝子を持つ人工酵母染色体の導入株の解析で明らかにした。5.YB-1の結合部位を持つプロモーターとしてDNAトポイソメラーゼIIαに注目しDNAトポイソメラーゼIIの遺伝子のHeat Shockによる発言誘導にYB-1が結合しうるinvertedCCAATbox(Y-box)が関与することを示した。現在YB-1を中心とした細胞内の会合分子の同定をすすめている。一方MDR1プロモーターを用いたトポIを標的とする新しい治療法の開発は進行中である。

今年，我们将重点关注癌细胞因抗癌药物和最终靶标转录因子而表现出的早期反应应激信号转导，旨在基于表达和功能分析设计新的癌症治疗方法。转录因子YB-1作为分子靶点。另一方面，我们正在开展抗癌药物诱导基因的鉴定，特别是DNA损伤，并分离其调控区域。我们还针对新的分子靶点，重点关注转录因子，旨在设计新的治疗方法从调节转录因子的角度来看是有的。今年的成果是： 1.我们阐明了YB-1基因的基因组结构，并根据特征核酸结合区域冷休克结构域的外显子结构对该基因进行了进化研究。 2. YB-1蛋白的亚细胞定位和GFP融合蛋白的表达揭示了应激反应中核易位机制的存在。还发现磷酸化参与了这一转变。 3. 我们通过在报告基因转染的细胞系中表达反义，证明了应激反应导致的 MDRI 表达增加与 YB-1 的核转位相关。 4.对人工酵母染色体引入的含有MDR1基因的菌株的分析表明，不仅YB-1结合，而且结合位点附近的甲基化状态也参与MDRI启动子的表达。 5.重点关注DNA拓扑异构酶IIα作为具有YB-1结合位点的启动子，我们发现YB-1可以结合的反向CCAATbox（Y-box）参与热诱导DNA拓扑异构酶II基因表达震惊。。目前，我们正在进行细胞内相关分子的鉴定，主要是YB-1。与此同时，利用 MDR1 启动子靶向拓扑 I 的新治疗方法的开发正在进行中。