がん細胞がTGF-βの増殖抑制活性に対する応答性を失う責任異常分子の同定

鉴定导致癌细胞失去对 TGF-β 抗增殖活性反应性的异常分子

基本信息

批准号：
10152261
负责人：
加藤光保
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152261/
关键词：
角化細胞扁平上皮癌 transforming growth factor-β SMAD 増殖抑制浸潤

项目摘要

1.扁平上皮癌浸潤モデルの確立:コラーゲンゲルを用いた3次元培養法により、扁平上皮癌細胞がコラーゲンゲル内への浸潤性増殖を示す培養実験系を確立した。2.変異SMAD(Smad3D407E)によるTGF-βシグナルの抑制二大腸癌でSmad2に見つけられた変異と相同な変異を導入したSmad3D407EはSMADを介するTGF-βシグナルに優性抑制的に作用した。また、この変異Smad3を角化細胞株HaCaTに発現させると、TGF-βによる増殖抑制作用に抵抗性となった。さらに、このTGF-βに抵抗性を獲得した角化細胞を3次元培養で解析したところ、浸潤性増殖能を獲得していた。3.がんにおけるTGF-βシグナルの異常:甲状腺乳頭癌の免疫組織化学的検索により、TGF-βの染色性が高い症例は転移が多いことが示された。4.TGF-β特異型SMAD; Smad2とSmad3の機能解析:Smad2Δexon3というスプライス変異体を見つけた。Smad3によって発現が強く誘導されるp3TP-luxをレポーターとした場合、この変異体はSmad3と同等の発現誘導能を示した。このプロモーター領域にはSmad3は結合できるがSmad2は結合できない配列があるが、Smad2Δexon3はこの配列に結合し、exon3によってコードされた30アミノ酸がSmad2とSmad3のDNA結合能の違いを決めていた。また、角化細胞株HaCaTにおいて、TGF-βはSmad2とSmad3の両者を強く活性化したが、アクチビンは主にSmad3を活性化した。5TGF-βシグナルの標的遺伝子:TGF-βによる角化細胞の増殖抑制においてc-mycがSMADの標的遺伝子になっていた。また角化細胞におけるTGF-βの初期応答遺伝子のcDNA配列を決定した。この遺伝子は分子量19kDa、等電点10.9の新規塩基性核蛋白をコードしていた。

1.鳞状细胞癌侵袭模型的建立：采用胶原凝胶三维培养方法，建立了鳞状细胞癌细胞在胶原凝胶内呈侵袭性生长的培养实验体系。 2.突变体SMAD (Smad3D407E)对TGF-β信号的抑制 Smad3D407E引入了与两种结肠癌中Smad2中发现的突变同源的突变，对SMAD介导的TGF-β信号具有显着抑制作用。此外，当这种突变体Smad3在角质形成细胞系HaCaT中表达时，它对TGF-β的生长抑制作用产生抵抗。此外，当在三维培养中分析获得TGF-β抗性的角质形成细胞时，发现它们获得了以侵入方式增殖的能力。 3.癌症中TGF-β信号异常：甲状腺乳头状癌的免疫组织化学检查显示，TGF-β染色高的病例更容易发生转移。 4.TGF-β特异性SMAD；Smad2和Smad3的功能分析：我们发现了一个剪接变体，称为Smad2Δexon3。当使用Smad3强烈诱导表达的p3TP-lux作为报告基因时，该突变体表现出与Smad3相同的诱导表达能力。该启动子区域有一段序列可以结合Smad3但不能结合Smad2，但Smad2Δexon3与该序列结合，而exon3编码的30个氨基酸决定了Smad2和Smad3之间DNA结合能力的差异。此外，在角质形成细胞系HaCaT中，TGF-β强烈激活Smad2和Smad3，而激活素主要激活Smad3。 5TGF-β信号靶基因：c-myc是TGF-β抑制角质形成细胞增殖的SMAD的靶基因。我们还测定了角质形成细胞中TGF-β早期反应基因的cDNA序列。该基因编码一种新型碱性核蛋白，分子量为19kDa，等电点为10.9。