CD3合成酵素遺伝子により誘導される細胞増殖シグナルの機構解析

CD3合酶基因诱导细胞增殖信号的机制分析

• 批准号: 10152223
• 负责人: 古川 鋼一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152223/
• 关键词: ガングリオシド; 糖脂質; 糖転移酵素; メラノーマ; GD3; PC12

ヒトのメラノーマやT細胞白血病に特異的に発現するGD3の細胞増殖における意義につき、GD3合成酵素遺伝子を種々の細胞に導入して、その表現型の変化を検討することにより解析した。まずラット褐色細胞腫PC12に、GD3合成酵素遺伝子を導入したトランスフェクタントでは、1.著しい増殖速度の亢進、2.神経成長因子(NGF)による分化誘導に対する不応、3.無血清処置によるアポトーシスへの抵抗性の獲得などが主な変化として観察された。著しい増殖能をもたらしたメカニズムの検討のため、NGF受容体TrkAのリン酸化、その下流のMAPキナーゼの活性化状態につき検討したところ、GD3合成酵素遺伝子導入細胞では、NGF刺激の有無に関わらず、TrkAのリン酸とMAPキナーゼの活性化を認めた。種々のキナーゼインヒビターを用いた増殖抑制実験の結果から、このトランスフェクタントで見られる増殖の亢進がTrkA/Ras/MAPキナーゼ系を介していることが示唆された。また、TrkAの二量体形成もNGF刺激に無関係に見られた。よって遺伝子導入によりTrkAの構造的変異が惹起され、恒常的な活性化状態を招いたと思われる。また、無血清培地によるアポトーシス誘導に対して、このトランスフェクタントは抵抗性を示したが、PI3キナーゼインヒビターのワルトマニン存在下ではアポトーシス抵抗性が消失した。よって、このトランスフェクタントでは糖鎖変化によってPI3キナーゼ活性が上昇していることが示唆された。これらの結果は、メラノーマやT細胞白血病の腫瘍増殖の機構の一部を反映するものと思われ、現在メラノサイトに対する遺伝子導入、糖脂質改変を行って、その細胞変化の検討を行っている。

通过将GD3合酶基因引入各种细胞并检查其表型的变化，分析了在人素瘤和T细胞白血病中特异性表达的GD3的意义。首先，在将GD3合酶基因引入大鼠嗜铬细胞瘤PC12中的转染物中，观察到主要变化：1。显着提高生长速率，2。对神经生长因子（NGF）诱导分化的反应能力，而3。通过血清获得无血清的抗性性。为了研究导致显着增殖潜力的机制，我们研究了NGF受体TRKA的磷酸化和下游MAP激酶的激活状态。在GD3合酶转导的细胞中，观察到TRKA磷酸盐和MAP激酶的激活，无论是否刺激NGF。使用各种激酶抑制剂的生长抑制实验结果表明，该转染剂中看到的生长增加是由TRKA/RAS/MAP激酶系统介导的。此外，TRKA的二聚体形成独立于NGF刺激。因此，基因转移在TRKA中诱导结构突变，导致了激活的组成态。此外，尽管这种转染剂对无血清培养基抗凋亡的抗细胞凋亡具有抗性，但在存在PI3激酶抑制剂Waltomanin的存在下，凋亡耐药性消失了。因此，有人提出，由于该转染剂中的聚糖的变化，PI3激酶活性增加了。这些结果似乎反映了黑色素瘤和T细胞白血病中肿瘤生长机制的一部分，目前正在基因转移和向黑色素细胞进行糖脂修饰以检查细胞变化。

项目成果

Iwanaga Masako: "Paroxysmal nocturnal haemoglobinuria clones in patients with myelodysplastic syndromes." Br.J.Haematol.102. 465-474 (1998)

Iwanaga Masako：“骨髓增生异常综合征患者的阵发性睡眠性血红蛋白尿克隆。”

Fukuda Minoru: "Enhancement of in vitro and in vivo anti-tumor activity of anti-GD2 monoclonal antibody 220-51 against human neuroblastoma by granulocyte-macrophage colony-stimulating factor and granulocyte colony-stimulating factor." Int.J.Mol.Med.2. 471

Fukuda Minoru：“通过粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和粒细胞集落刺激因子增强抗 GD2 单克隆抗体 220-51 抗人神经母细胞瘤的体外和体内抗肿瘤活性。”

Borgeld Harm-Jan Warner: "Appropriately spaced nuclear localizing signals are necessary for efficient nuclear import of non-nuclear proteins." Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press).

Borgeld Harm-Jan Warner：“适当间隔的核定位信号对于非核蛋白的有效核输入是必要的。”