膜ミクロドメインのスフィンゴ糖脂質による細胞増殖・分化・死のシグナル制御

膜微区中鞘糖脂对细胞增殖、分化和死亡信号的调节

• 批准号: 14028029
• 负责人: 古川 鋼一
• 金额: $ 4.03万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028029/
• 关键词: ラフト; GEM; シグナル; リモデリング; 糖転移酵素; リン酸化; 増殖; ノックアウト

ラフト/GEMでのスフィンゴ糖脂質によるシグナル制御機構を糖鎖リモデリングにより解析した。マウス線維芽細胞株Swiss3T3において、GM1高発現クローンでは細胞増殖やPDGF受容体およびMAPKのリン酸化反応が低下し、GD3合成酵素cDNA導入では、明らかな増殖の亢進が認められた。MAPKリン酸化は、無血清処置後のFCS刺激では、GD3発現細胞がより強いMAPKリン酸化反応を示した。また、PDGF刺激によっても同様の傾向を認めたため、GD3高発現株におけるPDGFRの局在、GD3とPDGFRとの会合につき検討中である。一方、PC12細胞にGM1合成酵素cDNAを発現させると、NGF刺激に応答せず、TrkAのリン酸化、2量体形成、MAPKリン酸化なども見られなくなった。その機序として、TrkA、P75NTR、Rasが、非ラフト/GEM分画に移動していることが判明した。GM1の高発現がTrkAやRasのラフト/GEM局在を大きく変えることが示された。更に、ツニカマイシン処理後のPC12からTrkAを免疫沈降してGM1の結合を見たところ、matureな140kDaのTrkAには結合が見られたが、immatureな110kDaのTrkAには結合が見られなかった。さらに、複合型ガングリオシド合成酵素遺伝子KOマウスの脊髄後根神経節よりニューロンの初代培養系を確立し、その細胞数、生存日数、NGFに対する応答などを観察したが、現在のところ明瞭な変異は認められない。

通过聚糖重构分析了筏/GEM 中鞘糖脂的信号控制机制。在小鼠成纤维细胞系Swiss3T3中，GM1高表达克隆中的细胞增殖以及PDGF受体和MAPK的磷酸化降低，并且当引入GD3合酶cDNA时观察到增殖明显增加。关于MAPK磷酸化，GD3表达细胞在无血清处理后对FCS刺激表现出更强的MAPK磷酸化反应。此外，由于在 PDGF 刺激后观察到类似的趋势，我们目前正在研究 PDGFR 的定位以及 GD3 高表达菌株中 GD3 和 PDGFR 之间的关联。另一方面，当使PC12细胞表达GM1合酶cDNA时，它们对NGF刺激没有反应，并且TrkA磷酸化、二聚体形成和MAPK磷酸化也不存在。发现其机制是 TrkA、P75NTR 和 Ras 转移到非 raft/GEM 部分。 GM1 的高表达可显着改变 TrkA 和 Ras 的 raft/GEM 定位。此外，当衣霉素处理后从PC12中免疫沉淀TrkA并观察到GM1结合时，观察到与成熟140kDa TrkA的结合，但没有观察到与未成熟110kDa TrkA的结合。此外，我们还建立了复合神经节苷脂合酶基因KO小鼠背根神经节神经元的原代培养体系，并观察其细胞数量、存活时间、对NGF的反应等，但目前尚未检测到明确的突变。 't。

项目成果

Mitsuda, T. et al.: "Over-expression of ganglioside GM1 results in the dispersion of platelet derived growth factor receptor from glycolipid-enriched microdomains and in the suppression of cell growth signals"J.Biol.Chem.. 277. 11239-11246 (2002)

Mitsuda, T. 等人：“神经节苷脂 GM1 的过度表达导致血小板衍生的生长因子受体从富含糖脂的微结构域中分散，并抑制细胞生长信号”J.Biol.Chem.. 277. 11239-

Chen, H.H.et al.: "Suppression of lung metastasis of mouse Lewis lung cancer P29 with transfection of the ganglioside GM2/GD2 synthase gene"Int.J.Cancer. 103. 169-176 (2002)

Chen, H.H. 等人：“通过转染神经节苷脂 GM2/GD2 合酶基因抑制小鼠 Lewis 肺癌 P29 的肺转移”Int.J.Cancer。

Yoshida, S. et al.: "An Anti-GD2 Monoclonal Antibody Enhances Apoptotic Effects of Anti-cancer Drugs against Small Cell Lung Cancer Cells via JNK (c-Jun Terminal Kinase) Activation"Jpn J. Cancer Rest. 93. 816-824 (2002)

Yoshida, S.等人：“抗GD2单克隆抗体通过JNK（c-Jun末端激酶）激活增强抗癌药物对小细胞肺癌细胞的凋亡作用”Jpn J. Cancer Rest。