ガングリオシド糖鎖のリモデリングによる細胞増殖制御機構の解析

神经节苷脂糖链重构分析细胞增殖调控机制

• 批准号: 09254248
• 负责人: 古川 鋼一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09254248/
• 关键词: ガングリオシド; 糖転移酵素; PC12; メラノーマ; メラノサイト; 神経成長因子; TrkA; 増殖

本研究では、ラット褐色細胞腫PC12およびメラノサイト-メラノーマ細胞のシステムを用いて、(1)糖鎖リモデリング細胞の形態や増殖度などの表現型の変化、(2)その増殖シグナル伝達分子や増殖関連転写因子の変化、(3)ガングリオシドと会合し相互作用する分子の同定と意義を解明することにより、細胞増殖制御におけるガングリオシドの役割と、癌細胞における意義を明らかにせんとした。PC12にβ1,4GalNAc転移酵素、α2,シアル酸転移酵素cDNAを導入し、増殖度とNGFに対する反応性(突起伸長)を検討したところ、後者のトランスフェクタントは著しく増殖度が亢進すると共に、NGFに不応性となった。この細胞におけるシグナル分子の変異を検討した結果、恒常的なNGF受容体(TrkA)のリン酸化とMAPKの活性化を認めた。糖鎖変異の検討ではGD1bの発現上昇が最も顕著に認められた。ハービマイシンA、K252a、ワルトマニン、PD98059などのインヒビターを用いた実験より、TrkA、Raf、Ras、MEKおよびMARKを介する経路の持続的活性化が、分化ではなく増殖の方向にPC12細胞を誘導したと考えられた。現在、GD1bとTrkAとの相互反応と受容体の二量体形成に関して検討すると共に、レチノイン酸添加などによるアポトーシス誘導への感受性の変異を検討中であり、トランスフェクタントにおける抵抗性の出現など、興味ある結果が得られつつある。またヒトメラノーマの初代培養を行い良好な増殖条件を確立すると共に、現在、3種の糖転移酵素遺伝子導入を進めており、樹立したトランスフェクタントについてPC12と同様の解析を行う予定である。

在这项研究中，使用大鼠棕色的Celloma PC12和黑素细胞 - 黑色素瘤细胞系统，（1）表达会发生变化，例如糖链重塑细胞的形式和增殖，以及（2）通过阐明其增殖信号传递和增殖相关转移因子的变化，（3）与神经苷相互作用的分子的鉴定和意义，神经节苷脂在细胞生长控制中的作用以及癌细胞的重要性所显示的。将β1,4GALNAC转移性酶，α2和唾液酸转移cDNA cDNA引入PC12，并检查了对NGF的增殖和反应（突出的生长），后一种转染剂显着增加，生长程度显着增加无法进行NGF。由于检查了这些细胞中信号分子突变的结果，观察到了永久性NGF受体（TRKA）磷酸化和MAPK的振兴。考虑到糖链突变，GD1B表达的上升最为突出。从使用抑制剂（例如Harvimycin A，K252a，Waltmanin，pd98059）的实验，通过TRKA，RAF，RAS，MEK，MEK和MARK诱导的PC12细胞的可持续激活在增殖方向上。目前，我们正在考虑GD1B和TRKA之间的互连以及受体的双体形成，并通过添加视黄酸等考虑了对凋亡的敏感性突变，正在获得兴趣结果。此外，除了建立人类Noma的第一个代代培养物的良好生长条件外，目前还引入了三种糖旋转酶基因，并且将进行与PC12相同的分析。

项目成果

Goi,T.: "Reduced expression of deleted colorectal carcinoma(DCC)protein in established colon cancers:Analysis by a specific monoclonal antibody." Brit.J.Cancer. 77. 466-471 (1998)

Goi,T.：“已建立的结肠癌中删除的结直肠癌 (DCC) 蛋白的表达减少：通过特定的单克隆抗体进行分析。”

Fukumoto,S.: "Genetic remodeling of gangliosides resulted in the enhanced reactions to the foreign substances in skin." Glycobiology. 7. 1111-1120 (1997)

Fukumoto,S.：“神经节苷脂的基因重塑导致皮肤对异物的反应增强。”

Nagata,Y.: "Expression cloning of rat cDNA of UDP-galactose:GD2 β1,3-galactosyltransferase that determines the expression of GD1b/GM1/GA1." J.Biol.Chem.272. 24794-24799 (1997)

Nagata, Y.：“确定 GD1b/GM1/GA1 表达的 UDP-半乳糖：GD2 β1,3-半乳糖基转移酶的大鼠 cDNA 的表达克隆。J.Biol.Chem.272 (1997)。

Ikeda,H.: "Mutated MAP kinase;A tumor rejection antigen of mouse sarcoma." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 94. 6375-6379 (1997)

Ikeda,H.：“突变的 MAP 激酶；小鼠肉瘤的肿瘤排斥抗原。”

Miyazaki,H.: "Peptides derived from a wild type murine proto-oncogene c-erbB-2/neu can induce CTL and tnmor suppression in syngeneic hosts." J.Immunol.159. 1336-1343 (1997)

Miyazaki,H.：“源自野生型鼠原癌基因 c-erbB-2/neu 的肽可以在同基因宿主中诱导 CTL 和肿瘤抑制。”