エンドセリン-1によるアポートシスの制御

内皮素-1 控制细胞凋亡

基本信息

批准号：
08671140
负责人：
七里眞義
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671140/
关键词：
エンドセリン血管内皮細胞アドレノメデュリン ET_A受容体 ET_B受容体

项目摘要

血管内皮細胞を無血清培養培地に交換したのち、時間経過とともに出現する浮遊死細胞を集めてDNAを抽出し、terminal transferaseにより^<32>P標識dideoxyATPを用いて3′-end labelingを行い、DNA fragmentationを検出、さらに、血清除去後、subnuclear bodyやクロマチンの濃縮像など、アポートシスに特徴的な所見の出現を形態学的に検討した。さらに、血管内皮細胞から産生されるエンドセリン-1やアドレノメデュリンなどの血管作動性因子が、c-Myc依存性アポートシスを制御するかどうかを調べた。エンドセリン-1・アドレノメデュリンは血清除去後アポートシスを濃度依存性に抑制した。エンドセリン-1の作用は内皮に発現しているET_B受容体を介して作用していた。また、血管内皮は大量のエンドセリン-1を産生・分泌していた。血管内皮には単一で高親和性のアドレノメデュリン受容体の存在を認めた。また、内皮にはAMmRNA(1.6kb)が発現し、培養上清中にAM様免疫活性を認めた。これらのことから、エンドセリン・アドレノメデュリンがオートクリン/パラクリン因子として、アポートシスの制御に関与しているのではないかとの仮設のもとに、培養上清中に抗ラットエンドセリン抗体・および抗ラットアドレノメデュリン抗体を添加し産生されたエンドセリン・アドレノメデュリンを中和したところ、アポートシスは著明に増加した。内皮はアドレノメデュリンにより濃度依存性にcAMP産生を増加させた。しかし、アドレノメデュリンのアポートシス抑制効果はcAMP阻害薬(Rp-cAMP)により影響を受けなかった。Forskolin(10^<-5>M)、Prostaglandin I_2(10^<-6>M)はcAMP産生を促進したにもかかわらず、アポートシス抑制作用は示さなかった。アドレノメデュリンのアポートシス抑制作用はそのcAMP産生促進作用と一致しないことから、cAMP以外の情報伝達経路が関与している可能性が考えられた。

在用无血清培养基取代血管内皮细胞后，收集了随着时间的时间出现的浮动死细胞提取DNA，并使用 ^<32> p标记的DodeoxyAtp使用末端转移进行3'-End标记，以检测DNA片段。此外，在清除血清后，在形态上检查了Aportsis的发现特征的出现，例如亚核体和浓缩染色质图像。此外，我们研究了血管活性因子（例如血管内皮细胞产生的内皮素-1和肾上腺肾上腺素）是否调节C-MYC依赖性的垂体。血清去除后，内皮素-1和肾上腺果蛋白以浓度依赖性方式抑制了垂体。内皮素-1的作用是通过内皮中表达的ET_B受体产生的。此外，血管内皮产生并分泌大量内皮素-1。在血管内皮中观察到单个高亲和力肾上腺肾上腺素受体的存在。此外，在内皮中表达AM mRNA（1.6 kb），并在培养物上清液中观察到类似Am样的免疫活性。基于这些原因，为了将内皮素和肾上腺素蛋白作为一种自分泌/旁分泌因子，通过添加抗raT内皮素和抗鼠性肾上腺肾上腺素蛋白抗体来对培养物和培养物持续增长，从而将所得的内皮素和肾上腺素化蛋白中和。内皮以肾上腺肾上腺素的浓度依赖性增加营地产量。然而，肾上腺抑制蛋白的抑制作用不受cAMP抑制剂（RP-cAMP）的影响。尽管Forskolin（10^<-5> m），前列腺素I_2（10^<-6> m）促进了营地生产，但它们没有表现出凋亡抑制作用。由于肾上腺素蛋白的抑制作用与其营地生产促进作用不一致，因此可能涉及cAMP以外的其他信息传输途径。