新規循環調節性ペプチドの発現ならびに機能解析

新型循环调节肽的表达及功能分析

基本信息

批准号：
19659200
负责人：
七里眞義
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19659200/
关键词：
生理活性因子新規循環調節性ペプチド全長濃縮cDNA

项目摘要

研究代表者はこれまでバイオインフォマティクス解析によって内因性生理活性因子をコードする可能性が高いcDNA配列をヒト全長濃縮cDNAライブラリーから選択して機能解析する新たな手法を考案し、降圧活性を有する多機能性生理活性ペプチドであるサリューシンなどを発見してきた。本手法を改良する過程でヒトの臓器に広範囲に発現している新規ペプチドが存在する可能性を見出し、サリューシンとは異なるメカニズムの降圧活性を示す新たなアミノ酸配列を見出した。本ペプチド配列を化学合成してその生理活性を検討したところ、ラット灌流心ワーキングモデルにて大動脈流量を著明に低下させるものの、invivoラットではサリューシンのような徐脈は惹起しないことなどが明らかになった。また、この新規循環調節性ペプチドをコードする遺伝子がヒトの各臓器に広範に発現していることをmRNAレベルで確認した上で、特異的なポリクローナル抗体を作成してラット主要臓器を用いて検討したところ、蛋白レベルでも広範に発現していることが明らかになった。本ペプチドは溶解性が低いため、精製に必要な逆相高速液体クロマトグラフィーの条件設定に苦慮してきたが、作成したポリクローナル抗体を用いたカラムを作成し、溶出液の免疫活性の検出に必要なradioimmunoassay系の確立に成功した。そのため、ヒト体液における分子存在様式の確定のために必要な条件が揃うこととなった。

主要研究人员设计了一种新方法，利用生物信息学分析从人类全长富集 cDNA 文库中选择和功能分析可能编码内源生理活性因子的 cDNA 序列，他发现了功能性生理活性肽，例如 salusin。在改进这种方法的过程中，我们发现了存在一种在人体器官中广泛表达的新肽的可能性，并发现了一种新的氨基酸序列，它通过与salusin不同的机制表现出抗高血压活性。当我们化学合成这个肽序列并检查其生理活性时，我们发现虽然它在大鼠灌注心脏工作模型中显着减少主动脉流量，但它不会像salusin那样在体内诱导大鼠心动过缓。此外，在mRNA水平上确认编码这种新型循环调节肽的基因在人体各个器官中广泛表达后，我们创建了一种特异性多克隆抗体，并使用大鼠的主要器官对其进行了研究，结果表明它也广泛表达。在蛋白质水平上。由于该肽的溶解度较低，因此很难设定纯化所需的反相高效液相色谱条件。但是，我们使用我们创建的多克隆抗体创建了一个色谱柱，并用它来检测该肽的免疫活性。洗脱液成功建立。因此，确定人体体液中分子存在方式所必需的条件已经满足。