C-myc遺伝子による生理活性因子の制御とアポトーシスの機構

C-myc基因对生物活性因子和细胞凋亡机制的控制

基本信息

批准号：
07671117
负责人：
七里眞義
金额：
--
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671117/
关键词：
c-myc遺伝子 c-Myc蛋白生理活性因子エンドセリン転写調節

项目摘要

Gene targetingを含む遺伝子操作により樹立したc-Myc発現量が異なる各細胞株(ラット線維芽由来親細胞(TGR-1^<+/+>)、c-mycへテロ欠失細胞(HET15^<+/->,HET16^<+/->)、外来c-myc発現細胞(LacO3^<+/-,+>,LacO16^<+/-,+>))を用いて以下の実験を行った。ヒトエンドセリン(ET)-1遺伝子5′-隣接領域(-875-+51bp)をCAT遺伝子上流に挿入し(pET1【.right filled triangle.】875)、種々のdeletion constructsを作成し、各細胞での転写活性を比較検討した。HET15^<+/->,HET16^<+/->,LacO3^<+/-,+>LacO16^<+/-,+>の各細胞ではTGR-1^<+/+>に比較し、pET1【.right filled triangle.】875による転写活性は著明に低かった。Deletion constructsのpET1【.right filled triangle.】642の活性は減弱、pET1【.right filled triangle.】372は著明に亢進、pET1【.right filled triangle.】179,pET1【.right filled triangle.】20は減弱していたが、HET15^<+/->ではTGR-1^<+/+>に比較し活性は著明に低かった。ヒトc-Myc発現vector(pSPT-Myc)は、HET15^<+/->においてpET1【.right filled triangle.】875をtransactivateしたが、高用量ではCAT活性を抑制した。pSPT-MycはpET1【.right filled triangle.】372の転写活性を著明に亢進させたが、高用量でも減弱させず、pET1【.right filled triangle.】642,pET1【.right filled triangle.】179,pET1【.right filled triangle.】20の活性をtransactivateしなかった。以上の結果から、c-Myc蛋白はその生理的発現量でET-1遺伝子転写を2相性に強力に調節していることが明らかとなった。ET-1遺伝子上流((-857--642bp)および(-372--179bp))にはc-Myc蛋白による転写促進領域が、(-642bp--372bp)には抑制領域が存在することも示された。しかし、E-boxは(-656--660)にしか存在せず、未知の転写制御機構の存在が示される。

基因通过基因操作建立具有不同水平c-Myc表达的细胞系，包括靶向（大鼠成纤维细胞来源的亲本细胞（TGR-1^+/+>）、c-myc异源缺失细胞（H ET15^<+/->,HET16^<+/->)、外源性c-myc表达细胞(LacO3^<+/-,+>,LacO16^<+/-,+>))我们进行了实验。我们将人内皮素 (ET)-1 基因的 5' 侧翼区域 (-875-+51bp) 插入到 CAT 基因 (pET1 [.右实心三角形]875) 上游，创建了各种缺失构建体，并进行了比较的转录活性。与 TGR-1^<+/+>、pET1[ 相比，HET15^<+/->、HET16^<+/->、LacO3^<+/-,+>LacO16^<+/-,+> 细胞。 .右实心三角形。]875 具有显着较低的转录活性。缺失构建体pET1【.直角三角形.】642的活性减弱，pET1【.直角填充三角形.】372活性显着增加，pET1【.右角填充三角形.】179，pET1【.右角填充三角形.】20活性减弱，但HET15^<+/->的活性显着低于TGR-1^<+/+>。人c-Myc表达载体(pSPT-Myc)反式激活HET15^<+/->中的pET1[.右实心三角形]875，但在高剂量下抑制CAT活性。 pSPT-Myc 显着增强了 pET1【.右填充三角形。】372 的转录活性，但即使在高剂量下也没有减弱它，pET1【.右填充三角形。】642，pET1【.右填充三角形。】179，确实如此。不反式激活pET1的活性【.右实心三角形。】20。上述结果表明，c-Myc蛋白根据其生理表达水平以双相方式强烈调节ET-1基因转录。 ET-1 基因上游的 c-Myc 蛋白还存在一个转录促进区域（(-857--642bp) 和 (-372--179bp)），以及位于 (-642bp--372bp) 的抑制区域。显示。然而，E-box仅存在于(-656--660)，表明存在未知的转录控制机制。