Ca^<2+>・リン脂質結合領域(C_2)を有する新しい蛋白質の機能と作用機構

具有Ca^2+/磷脂结合域的新蛋白的功能和作用机制（C_2）

基本信息

批准号：
08670147
负责人：
佐々木卓也
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670147/
关键词：
神経伝達物質 Rabphilin-3A Doc2 α-アクチニン C2領域 Ca^<2+>センサー

项目摘要

私共の研究室では、2個のC2様領域を有する新しい蛋白質を2つ見い出し、それぞれRabphilin-3AとDoc2と命名している。これらの蛋白質は、シナプス小胞に局在し、そのC2様領域でCa^<2+>とリン脂質に結合することから、神経伝達物質の放出においてCa^<2+>センサーとして機能している可能性が高い。本年度の本研究では、Rabphilin-3AとDoc2が細胞内で神経伝達物質の放出に実際に働いていることを証明した。すなわち、私共は、Rabphilin-3AとDoc2と両者のアンチセンスや変異体の遺伝子を、ヒト成長ホルモン(GH)の遺伝子と共に、PC12細胞に強制発現させることによって、Rabphilin-3AとDoc2がCa^<2+>依存性のGHの分泌を制御することを明らかにした。さらに、Rabphilin-3Aとその変異体のリコンビナント蛋白質をヤリイカの巨大シナプスにマイクロインジェクションすることによって、Rabphilin-3Aが神経伝達物質の放出を制御することを明らかにした。一方、私共は、Rabphilin-3AがC2様領域以外のN末端側でα-アクチニンと結合し、α-アクチニンによるF-アクチニンのbundlingを促進することを明らかにした。したがって、Rabphilin-3Aは細胞骨格系をも介して神経伝達物質の放出を制御している可能性が出てきた。また、私共は、Doc2がC2様領域以外のN末端側でホルボールエステル結合領域であるCl領域を有する新しい蛋白質と結合することを見い出すと共に、この結合がホルボールエステル依存性であることを明らかにした。ホルボールエステルは神経伝達物質の放出を促進するが、Doc2とこの蛋白質との結合がその機構に作用している可能性が出てきた。このように、本年度の本研究は予想以上に進展し、当初の目的はほぼ完全に達成することができた。

在我们的实验室中，两个具有两个C2区域的新蛋白质具有两种新蛋白质，分别命名为Rabphilin-3a和Doc2。这些蛋白质位于突触质中，并在C2区域与Ca^<2+>的磷脂结合，因此在释放神经递质时，它可以作为CA^<2+>传感器的功能。今年的研究证明，Rabphilin-3a和Doc2实际上正在努力释放细胞中的神经递质。换句话说，rabphilin-3a和doc2是通过强迫rabphilin-3a和doc2以及人类生长激素（GH）的基因以及人类生长激素的基因（ GH）。此外，已经揭示了Rabphilin-3a通过使Rabphilin-3a及其突变体重组蛋白变成鱿鱼的巨大罪恶来控制神经递质的释放。另一方面，我们阐明了Rabphilin-3a在除C2区以外的N端一侧结合α-肌动蛋白，并通过α-肌动蛋白促进F-肌动蛋白捆绑。因此，Rabphilin-3a可能通过细胞骨架系统控制了神经递质的释放。此外，我们发现DOC2与具有Cl区域的新蛋白质结合，该蛋白在C2区域以外的N端侧是HOL球酯结合区域，并且该键是HOL Ball Ester-依赖。 HOL -BALL酯促进了神经递质的释放，但是DOC2和蛋白质之间的结合可能会在机制上作用。这样，今年的研究取得了比预期的要多，并且几乎完全实现了最初的目的。