C_2様領域を持つ新しい蛋白質Rabphilin-3AとDoc2の機能と作用機構

具有C_2样区域的新蛋白Rabphilin-3A和Doc2的功能和作用机制

基本信息

批准号：
07268212
负责人：
佐々木卓也
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

私共の研究室では、2個のC2様領域を有する新しい蛋白質を2つ見い出し、それぞれRabphilin-3AとDoc2と命名している。これらの蛋白質は、シナプス小胞に局在し、そのC2様領域でCa^<2+>リン脂質に結合することから、神経伝達物質の放出においてCa^<2+>センサーとして機能している可能性が高い。Rabphilin-3Aは、C末端側のC2様領域以外に、N末端側にRab3A結合領域を有している。一方、Doc2は、C末端側にC2様領域を有しているが、N末端側にRab3A結合領域を有していない。また、どちらの蛋白質も膜貫通領域を有していないが、本年度の本研究で、Rabphilin-3Aは、N末端側でシナプス小胞上のアンカリング蛋白質に結合することによって、シナプス小胞に結合していることを明らかにした。したがって、Doc2にもシナプス小胞結合領域が存在し、Doc2は、そこを介して、シナプス小胞上のアンカリング蛋白質に結合していると考えられる。さらに、本年度の本研究で、Rabphilin-3AのN末端側またはC末端側のリコンビナント蛋白質をヤリイカの巨大シナプスにマククロインジェクションすると、神経伝達物質の放出が抑制されることを明らかにした。また、Rabphilin-3AやDoc2のN末端側またはC末端側の遺伝子をヒト成長ホルモン(GH)の遺伝子と共にPC12細胞に強制発現させると、高K^+刺激によるCa^<2+>依存性のGHの分泌が抑制されることを明らかにした。これらの結果から、Rabphilin-3AやDoc2はいくつかの機能領域に分けられ、各々の機能領域でそれぞれ特異的な蛋白質と結合し、蛋白質一蛋白質相互作用により神経伝達物質の放出を制御している可能性が示唆された。このように、本年度の本研究は予想以上に進展し、当初の目的はほぼ完全に達成することができた。

在我们的实验室中，两个具有两个C2区域的新蛋白质具有两种新蛋白质，分别命名为Rabphilin-3a和Doc2。这些蛋白质在突触质中占主导地位，并与C2区域中的Ca^<2+>磷脂结合，因此它们可能在神经递质的释放中充当Ca^<2+>传感器。除了C末端的C2区域外，Rabphilin-3a在N末端具有RAB3A结合区域。另一方面，DOC2在C末端具有C2区域，但在N端侧没有RAB3A结合区域。此外，两种蛋白质都没有膜穿透区域，但是在今年的这项研究中，Rabphilin-3a通过结合N端侧的锚定蛋白来与突触囊泡结合。因此，DOC2中有一个突触连接区域，人们认为DOC2与通过其锚定在突触Ultruction上的蛋白质结合。此外，这项研究还指出，今年的研究将通过在Rabphilin-3a的N末端或C末端使用重组蛋白来减少神经递质的释放，以减少鱿鱼的巨大罪行。同样，如果rabphilin-3a或doc2的N端侧或C末端的基因与人类生长激素（GH）的基因一起被迫进入PC12细胞，则Ca^<2+>依赖性依赖^+刺激。基于这些结果，Rabphilin-3A和DOC2分为几个功能区域，将它们与每个功能区域中的特定蛋白质结合，并通过蛋白质单蛋白相互作用来控制神经递质。这样，今年的研究取得了比预期的要多，并且几乎完全实现了最初的目的。