癌遺伝子を用いた実験的ヒト白血病モデルの作製

使用癌基因创建实验性人类白血病模型

基本信息

批准号：
61015015
负责人：
平井久丸
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1988
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61015015/
关键词：
癌遺伝子トランスフェクション ras遺伝子 cDNA

项目摘要

ヒト癌細肪の高分子DNAをNIH3T3細胞に導入し活性化癌遺伝子を検出する実験系を用いることによって、各種のヒト癌細胞において優性な活性化癌遺伝子が同定・単離されている。この系を用いた場合の活性化癌遺伝子の検出率は10〜20%程度であり、それらの多くはras familyに属する遺伝子である。この検出率を上昇させる目的で、DNAをトランスフェクトしたNIH3T3細胞をヌード・マウスの皮下に接種し、細胞のトランスフォーメーションを腫瘍形成で判定するIn vivo Selection assay法を用いた。その結果、27例中18例で腫瘍形成を認め、うち9例にN-ras遺伝子、1例にK-ras遺伝子の活性化を認めた。この結果から、N-ras遺伝子の活性化はヒト白血病の発症に重要な役割を担うことが予想された。また白血病の前段階にあると考えられているMyelodysplastic Syndrome患者の骨髄細胞DNAを用いてIn vivo selection assay法を試みた結果、18例中10例に腫瘍形成を認め、うち3例にN-ras遺伝子の活性化を認めた。これら3例の活性化N-ras遺伝子を解析した結果、いずれも13番目のアミノ酸コドンの点突然変異が活性化の原因であり、AMLに認められる12番目もしくは61番目のアミノ酸コドンの点突然変異と異なることが明らかになった。これらのN-ras遺伝子のcDNAクローニングを行い、レトロベクターに導入することを試みている。一方、各種のLeukemiaにおいて異常発現の認められた、Src familyに属する癌遺伝子のcDNAクローニングも現在行っている。これらのcDNAを単独あるいは二者同時に造血前駆細胞に導入し、in vitroで白血病モデルを作製することを目的に研究を進行させている。

通过使用实验系统，其中将来自人类癌症脂肪的聚合物DNA引入NIH3T3细胞并检测活化的癌基因，在各种人类癌细胞中已经鉴定出来并分离了主动激活的癌基因。使用该系统时，活化的癌基因的检测率约为10-20％，其中大多数是属于RAS家族的基因。为了提高该检测率，在裸鼠中皮下接种了用DNA转染的NIH3T3细胞，并使用体内选择测定方法通过肿瘤形成确定细胞转化。结果，27例病例中有18例显示出肿瘤的形成，其中9例显示了N-RAS基因的激活和1例K-RAS基因。从这些结果中可以预测，N-RAS基因的激活在人类白血病的发展中起重要作用。此外，我们尝试使用骨髓增生综合征DNA进行体内选择测定方法，该方法被认为是在白血病的阶段，其中18例患者中有10例显示出肿瘤的形成，其中3例显示N-RAS基因的激活。在这三个病例中对激活的N-RAS基因的分析表明，在所有情况下，第13个氨基酸密码子的点突变都是激活的原因，并且它与在AML中观察到的第12或第61氨基酸密码子的点突变不同。这些N-RAS基因是克隆的cDNA并引入逆转录器。另一方面，属于SRC家族的癌基因的cDNA克隆在各种白血病中都异常表达。正在进行研究，目的是将这些CDNA单独或同时或同时在造血祖细胞中引入造血祖细胞，并在体外创建白血病模型。