ヒト白血病の遺伝子診断

人类白血病的基因诊断

基本信息

批准号：
02262209
负责人：
平井久丸
金额：
$ 6.4万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02262209/
关键词：
白血病 ras遺伝子 ABL遺伝子 p53遺伝子 RTーPCR法 SSCP法

项目摘要

ras遺伝子は1塩基の点突然変異によって活性化を受ける。このためこの領域を含む部分をRTーPCR法によって増幅し、オリゴヌクレオチド・プロ-ブを用いてDifferential hybridizationを行った。その結果,MDS症例90例中13例にNーras遺伝子の活性化が検出され,その後の経過観察の結果,この13例中11例が白血病へ移行した。ras遺伝子が正常であった例で経過を追うことのできたMDS症例においては白血化がほとんど見られないことから,ras遺伝子の活性化はMDSの白血化に対する重要な予後判定因子であると結論された。Ph^1陽性CMLおよびPh^1陽性ALLにおけるt(9;22)におけるBCR遺伝子上の切断点を検討するため、検体よりRNAを抽出しRTーPCR法を用いて解析を行った。Ph^1陽性CMLにおいては全例でMーbcr領域に切断点が検出されたが、Ph^1陽性ALLではMーbcrとmーbcr領域に切断点を持つものがおよそ半数ずつ存在した。またCML急性転化例5例のうち3例では切断点がMーbcr領域の両方に観察された。うち1例では急性期にmーbcr型の切断も出現し,治療後に消失した。以上の結果から,mーbcr型BCR/ABL遺伝子と急性転化の関連が示唆された。p53遺伝子は大腸癌などでその変異が解析されており,変異部位は500bpの範囲にわたっている。このためRTーPCR法とSSCP法を用いて変異の有無を解析した。解析の結果,50例の白血病症例中4例にp53遺伝子の変異が予想された。これらのcDNAの塩基配列を決定した結果いずれも片方のアレルの変異と他方のアレルでのp53mRNAの欠損が明らかになった。この結果から,これらの症例においては両方のアレルでp53遺伝子が不活化され,この不活化が白血病の発症に寄与している可能性が考えられた。

ras 基因由单核苷酸点突变激活。因此，通过RT-PCR扩增包含该区域的部分，并使用寡核苷酸探针进行差异杂交。结果，90例MDS病例中有13例检测到N-ras基因激活，随后随访的结果是，这13例中有11例进展为白血病。在ras基因正常且病程可追踪的MDS病例中很少观察到白血病，因此得出结论ras基因激活是MDS白血病的重要预后因素。为了研究 Ph^1 阳性 CML 和 Ph^1 阳性 ALL 中 BCR 基因在 t(9;22) 处的断点，从样本中提取 RNA 并使用 RT-PCR 进行分析。在 Ph^1 阳性 CML 中，所有病例均在 M-bcr 区域检测到断点，但在 Ph^1 阳性 ALL 中，大约一半在 M-bcr 和 m-bcr 区域有断点。此外，在 5 例伴有急变的 CML 病例中，有 3 例在两个 M-bcr 区域都观察到了断裂点。 1例急性期还出现MBCR型截肢，治疗后消失。这些结果表明 mbcr 型 BCR/ABL 基因与急变期之间存在关系。 p53基因突变已在结肠癌等中进行了分析，突变位点跨越500bp范围。为此，我们使用 RT-PCR 和 SSCP 方法分析了突变的存在或不存在。分析结果显示，50 例白血病病例中，预计有 4 例会发生 p53 基因突变。对这些 cDNA 碱基序列的测定揭示了一个等位基因的突变和另一个等位基因中 p53 mRNA 的缺失。这些结果表明，在这些病例中，两个等位基因中的 p53 基因均失活，并且这种失活可能导致白血病的发生。