ヒト血白病の遺伝子診断

人类血白血病的基因诊断

基本信息

批准号：
03258208
负责人：
平井久丸
金额：
$ 6.4万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

p53遺伝子は癌抑制遺伝子と考えられており,大腸癌や乳癌などの固型癌において高頻度に両方のアレルで変異や欠失を生じることが明らかになっている。白血病の発症過程にp53遺伝子が関与している可能性を解析する目的でRT‐PCR法およびSSCP法を用いてp53遺伝子の変異解析を行った。変異の予想されるcDNA断片は直接シ-クエンス法を用いて塩基配列を決定した。その結果,50例の白血病症例中4例にp53遺伝子の変異が検出された。これらの4例では片方のアレルでのp53遺伝子の変異の変異と他方のアレルでのp53mRNAの欠損が明らかになり,p53蛋白の不活化が白血病の発症に関与している可能性が考えられた。骨髄異形成症候群は一種の前白血病状態と考えられているが,これらの症例についてもp53遺伝子の変異解析を行った結果,32例中3例にp53遺伝子の変異を検出した。これら3例はいずれも白血化に近い状態あるいは白血化した状態であったため,p53遺伝子の不活化と白血化の関連が予想された。転座型白血病においてキメラ遺伝子が形成される疾患として,t(9;22)転座を示す慢性骨髄性白血病やt(15;17)転座を示す急性前骨髄球性白血病などが知られている。これらで形成されるキメラ遺伝子はこれらの遺伝子の接合点をはさむプライマ-を設定し,RT‐PCR法を用いて検出することができる。これらの系を用いてこの検出法の感度を検定したところ,白血病細胞がサンプル中に10^5〜10^6個に1個存在すればこれを検出しうることが示された。このような手法は白血病の治療後の微量残存白血病細胞の検出に有効であると考えられた。

p53基因被认为是抑癌基因，研究表明，在结肠癌和乳腺癌等实体癌中，两个等位基因经常发生突变或缺失。为了分析p53基因参与白血病发病的可能性，采用RT-PCR和SSCP方法对p53基因的突变进行了分析。使用直接测序确定具有预测突变的cDNA片段的核苷酸序列。结果，50 例白血病病例中有 4 例检测到 p53 基因突变。在这四种情况中，一个等位基因中的 p53 基因发生突变，而另一个等位基因中的 p53 mRNA 缺失，表明 p53 蛋白的失活可能与白血病的发生有关。骨髓增生异常综合征被认为是白血病前期病症的一种，对这些病例的p53基因突变分析结果显示，32例中有3例检测到p53基因突变。这三个病例均处于接近白血病状态或处于白血病状态，因此p53基因失活与白血病之间的关系是可以预期的。作为易位型白血病中形成嵌合基因的疾病，已知有表现出t(9;22)易位的慢性粒细胞白血病和表现出t(15;17)易位的急性早幼粒细胞白血病。由这些基因形成的嵌合基因可以通过设置将这些基因的连接点夹在中间的引物并使用RT-PCR来检测。当使用这些系统测试该检测方法的灵敏度时，结果表明，如果样品中存在 10^5 至 10^6 分之一的白血病细胞，则可以检测到白血病细胞。这种方法被认为可有效检测白血病治疗后残留的微量白血病细胞。