p53、p51、MDM2のSUMO化による制御機構

p53、p51 和 MDM2 SUMO 化的控制机制

基本信息

批准号：
16022269
负责人：
安田秀世
金额：
$ 2.94万
依托单位：
Central Laboratory, Nippon Flour Mills Co., Ltd.
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16022269/
关键词：
p53 スモ化 PIAS 翻訳後修飾転写因子癌抑制遺伝子

项目摘要

p53、p51のスモ化の意義について焦点を絞って研究した。その結果1)p53のホモログであるp51AあるいはBがスモ化されるかどうかを検討した。P51Bは高濃度のE2、Ubc9存在下ではE1とスモのみで、E3が存在しなくてもスモ化されたが、p51Aはスモ化されなかった。一方、低濃度のE2存在下ではスモ化にはPIASタンパク質の存在が必須であった。PIASタンパク質のうちPIAS1,PIASxαあるいはPIASxβがE3として機能した。次にp51Bのリシンの変異体を作製して検討した結果C末のK637がスモ化されることが明らかとなった。このリシン残基はスモ化サイトの共通配列KXEのリシンにあたる。またこのC末のリシンに対応するリシンはp51Aには存在せず、しかもp51Aはスモ化されなかった。2)試験管内でのスモ化が確認できたp51Bが細胞内でもスモ化されるかどうかをU20S細胞にp51B、FLAGタグSUMO-1およびPIASタンパク質を移入して検討した。p51Bのスモ化をウエスタンブロッテングで調べた結果PIASの存在下で野生遺伝子のp51Bはスモ化されK637R変異体はスモ化されなかった。このスモ化は少なくともPIAS1、PIASxαあるいはPIASxβ存在下で認められた。5)さらにPIAS1と各種変異体を用いて転写活性に与えるPIAS1の影響を検討した結果PIAS1による転写活性上昇はスモ化によるものではなくPIAS1そのものが転写促進活性を持つためではないかと強く示唆された。

我们的研究重点是 p53 和 p51 sumoization 的重要性。结果，1)我们研究了p51A或B（p53的同源物）是否被SUMO化。在高浓度 E2 和 Ubc9 存在的情况下，即使在不存在 E3 的情况下，P51B 仅被 E1 和 sumo 素化，但 p51A 不被素素化。另一方面，在低浓度 E2 存在的情况下，PIAS 蛋白的存在对于求和至关重要。在PIAS蛋白中，PIAS1、PIASxα或PIASxβ充当E3。接下来，我们创建了p51B的赖氨酸突变体并对其进行了研究，结果表明C末端的K637被苏酰化。该赖氨酸残基对应于SUMO化位点的共同序列KXE中的赖氨酸。另外，p51A中不存在与该C末端赖氨酸对应的赖氨酸，并且p51A未被苏酰化。 2）我们通过将p51B、FLAG标记的SUMO-1和PIAS蛋白转染到U20S细胞中，检查了已在体外被证实可被sumoized的p51B是否也可以在细胞中被sumoized。当通过蛋白质印迹研究p51B苏酰化时，野生基因p51B在PIAS存在下被苏酰化，但K637R突变体未被苏酰化。至少在 PIAS1、PIASxα 或 PIASxβ 存在的情况下观察到这种总结。 5）此外，我们使用PIAS1和各种突变体研究了PIAS1对转录活性的影响，结果强烈表明PIAS1引起的转录活性的增加不是由于SUMO化，而是因为PIAS1本身具有转录促进活性。