分裂期染色体の脱凝縮の制御機構

有丝分裂染色体解凝聚的控制机制

基本信息

批准号：
07282216
负责人：
安田秀世
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07282216/
关键词：
wee1キナーゼ 14-3-3 tsTM13 染色体凝縮

项目摘要

染色体凝縮、脱凝縮に関与するcdc2キナーゼの活性制御機構の中でwee1キナーゼに注目し、wee1キナーゼ活性制御因子を酵母two-hybrid法を用い、マウスwee1キナーゼと結合する蛋白質として単離することを試みた。その結果、ラット14-3-3ζとアミノ酸レベルで99.6%相同性をもつマウスcDNAが単離された。14-3-3はRaf-1やBcr-Ablなどのキナーゼに結合してその活性を制御しているとの報告がある。このマウス14-3-3ζをMBPやGSTの融合蛋白質として大腸菌で発現させ、バキュロウイルスで発現させたwee1との結合について調べたところ、非燐酸化型weelおよびcdc2キナーゼにより燐酸化されたweelのいずれにも結合することが明らかとなった。cdc2キナーゼにより燐酸化されたweelはcdc2/cyclinBと結合しているが、この複合体にも14-3-3ζは結合した。また、こり結合はキナーゼドメインを含むC末領域においてみられ、制御ドメインであるN末領域には結合しなかった。現在14-3-3ζのwee1キナーゼ活性に対する効果を検討中である。一方染色体脱凝縮の制御機構が温度感受性であると考えられるtsTM13細胞についてはヒトゲノムDNA、neo遺伝子の移人、Alu配列をプローブにして2次復帰株のゲノムDNAライブラリーからおよそ20KbのゲノミックDNAがこのtsTM13細胞を相補する遺伝子として単離した。それをプローブにもちいてマウスcDNAライブラリーからcDNAを単離した。その結果このcDNAは未だ報告されていない遺伝子であった。一部タリンと相同性が高いが、それがどのような意味を持っているのかは今後の課題である。

我们关注CDC2激酶活性控制机制中参与染色体缩合和解缩合的wee1激酶，并使用我尝试的酵母二杂交方法分离出wee1激酶活性调节剂作为与小鼠wee1激酶结合的蛋白质。结果，分离出与大鼠14-3-3ζ在氨基酸水平上具有99.6%同源性的小鼠cDNA。据报道，14-3-3 与 Raf-1 和 Bcr-Abl 等激酶结合并调节其活性。该小鼠14-3-3ze在大肠杆菌中表达为MBP和GST的融合蛋白，并且研究了其与杆状病毒中表达的wee1的结合，结果表明它与两者都结合。被 CDC2 激酶磷酸化的 Weel 与 CDC2/cyclinB 结合，14-3-3ze 也与该复合物结合。此外，在包括激酶结构域的C端区域中观察到结合，并且没有与作为调节结构域的N端区域结合。我们目前正在研究 14-3-3ze 对 wee1 激酶活性的影响。另一方面，对于tsTM13细胞，其染色体解缩的控制机制被认为是温度敏感的，使用人类基因组DNA、neo基因转移和Alu 序列作为探针被分离作为互补基因。使用它作为探针，从小鼠 cDNA 文库中分离出 cDNA。结果，这个cDNA是一个尚未被报道过的基因。虽然它的某些部分与talin高度同源，但其意义仍有待未来确定。