がんの遺伝子治療に向けた超機能性人工オリゴヌクレオチドの創製

创造用于癌症基因治疗的超功能人工寡核苷酸

基本信息

批准号：
14030045
负责人：
今西武
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030045/
关键词：
人工核酸オリゴヌクレオチドアンチセンス法 BNA HCV NF-kB 翻訳阻害遺伝子治療

项目摘要

我々は、天然ヌクレオシドの糖部を架橋構造化によりN型やS型立体配座に固定した新しい人工核酸(BNA類)モノマー類を種々開発し、それらを導入したオリゴヌクレオチド(ODN)類の有用性について検討している。それらBNA類の中で、相補鎖RNAに対して極めて強く結合する2',4'-BNAで修飾したODN(BNA-ODN)を種々合成し、それらのアンチセンス分子としての機能評価を行なった。HepG2培養細胞中でC型肝炎ウイルス(HCV)を標的としたBNA-ODNによるアンチセンス効果をレポータープラスミドを用いて検討した結果、ループ構造の翻訳開始コドン近傍のみならずステム構造領域を標的部位とした場合でも、特異的で良好なアンチセンス効果が認められた。BNA-ODNの代わりに同配列のアンチセンス天然DNA-ODNでは全く効果がなく、ホスホロチオアート型PS-ODNでは非特異的な発現制御が認められるのみであった。また、先に述べた外来遺伝子のみならず、細胞内在性遺伝子を標的としたアンチセンス評価も検討した。すなわち、アポトーシスに深く関与している転写因子NF-κBのサブタイプの一つp65遺伝子についてBNA-ODNによるアンチセンス効果をHeLa細胞中で検討したところ、良好なアンチセンス効果が認められる結果となった。さらに、ODN分子の細胞内移行を向上させるため、さまざまな手法についても検討を加えた。

我们开发了各种新型人工核酸（BNA）单体，其中天然核苷的糖部分通过交联固定在N型或S型构象中，并且我们正在研究结合这些单体的寡核苷酸（ODN）的有用性我正在考虑性别。在这些BNA中，我们合成了各种用2',4'-BNA修饰的ODN（BNA-ODN），它们与互补链RNA结合极强，并评估了它们作为反义分子的功能。使用报告质粒检查BNA-ODN靶向丙型肝炎病毒（HCV）在培养的HepG2细胞中的反义效应，结果发现不仅环结构的翻译起始密码子附近，而且茎结构区域即使在这些情况下，也观察到了特异性且良好的反义效应。具有相同序列的反义天然DNA-ODN代替BNA-ODN完全没有效果，硫代磷酸酯PS-ODN仅表现出非特异性表达控制。我们还考虑了不仅针对上述外源基因而且还针对内源基因的反义评估。具体来说，当我们研究BNA-ODN对HeLa细胞中与细胞凋亡密切相关的转录因子NF-κB的亚型p65基因的反义作用时，我们发现它具有良好的反义作用。此外，还研究了各种方法来改善 ODN 分子的细胞内易位。