造血器腫瘍の遺伝子異常に基づいたアンチセンス治療法の開発

基于造血肿瘤遗传异常的反义疗法的发展

• 批准号: 08671248
• 负责人: 前川 平
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671248/
• 关键词: 造血器腫瘍; アンチセンス・オリゴヌクレオチド; 遺伝子異常; 慢性骨髄性白血病

最近、造血器腫瘍の病態が遺伝子レベルで解明され、得られた知見は遺伝子診断として臨床に還元されつつある。しかし、治療に関しては、レチノイン酸による急性前骨髄球性白血病の分化誘導療法以外に、分子標的を明確にしたものはないと言わざるを得ない。したがって次の目標は、異常遺伝子やその転写産物自体を標的とする疾病特異的な治療法の開発である。我々は平成8年度科学研究費の補助をうけ、活性化あるいは増幅された癌遺伝子に対するアンチセンス・オリゴヌクレオチド(AS ODN)を用いて白血病細胞の増殖抑制とその機序を検討してきた。本年度に得られた成果を下記にあげる。(1)慢性骨髄性白血病(CML)の特異的再構成遺伝子BCR-ABLに対するAS ODNがCML細胞の増殖を抑制し、その機序はアポトーシスの誘導であることを報告した。(2)c-myc AS ODNでc-mycの発現を低下させると白血病細胞株HL60の増殖が抑制され、さらにその状態からc-mycの発現を急に増強させると、G_1/S期境界の細胞が選択的に、かつ大量にアポトーシスをおこすことを見い出した。(3)がん抑制遺伝子WT1が白血病細胞で特異的に増幅されていることから、WT1に対するAS ODNを作製し検討したところ、K562などの白血病細胞株や新鮮白血病細胞の増殖を抑制できることを見い出した。これらの研究を通じ、AS ODNの作用機序、細胞膜透過性や至適培養条件、標的配列の選択基準などについて検討を行い、種々の問題点を指摘するとともに、数多くのノウハウを蓄積してきた。今後解決すべき問題点としては、低濃度での配列特異的な作用発現に必要なAS分子の設計、腫瘍細胞の増殖抑制を図るための標的遺伝子配列の選択、エンドサイトーシスによる細胞に取り込まれたAS ODNが、リソソームにトラップされずに標的mRNAと結合できるようなドラッグ・デリバリー・システムの開発があげられる。

最近，造血肿瘤的病理已在遗传水平上阐明，并且所获得的发现正在减少为临床实践作为遗传诊断。但是，关于治疗，必须说，除了使用视黄酸诱导急性前临床白血病分化的治疗外，没有其他明确的分子靶标。因此，下一个目标是开发针对异常基因及其成绩单本身的疾病特异性疗法。在1996年附属科学研究的帮助下，我们一直在研究使用反义寡核苷酸（AS ODN）来检查白血病细胞的机制和抑制，以激活或放大癌基因。今年获得的结果如下：（1）我们报告说，作为BCR-ABL的ODN，BCR-ABL是慢性髓样白血病（CML）中特定的重排基因（CML），抑制CML细胞的增殖，其机制诱发了凋亡。 （2）我们发现，随着ODN抑制白血病细胞系HL60的增殖，降低C-MYC的表达，并且突然增加了C-MYC从该状态的表达，导致了G_1/S相边界处细胞中的​​选择性和大量细胞凋亡。 （3）由于抑制癌症基因WT1在白血病细胞中特异性扩增，因此我们创建并检查为WT1的ODN，发现它可以抑制白血病细胞系的增殖，例如K562和新鲜的白血病细胞。通过这些研究，我们研究了AS ODN的作用机理，细胞膜渗透性，最佳培养条件以及选择目标序列的标准，并指出了各种问题，并积累了许多专有技术。将来将解决的问题包括设计为在低浓度下形成序列特异性作用所必需的分子，选择靶基因序列以抑制肿瘤细胞的生长，并开发药物递送系统，这些系统允许通过内吞作用将ODN作为ODN掺入细胞中，以通过内吞作用将目标mRNA捕获而不被溶酶体捕获。

项目成果

前川 平: "白血病のアンチセンス療法" Human Cell. 9. 17-24 (1996)

Taira Maekawa：“白血病的反义疗法”《人类细胞》9. 17-24 (1996)。

Yamagami T et al.: "Growth inhibition of human leukemia cells by WT1(Wilmstumor gene)antisense oligodeoxynucleotides" Blood. 87. 2878-2884 (1996)

Yamagami T 等人：“WT1（Wilmstumor 基因）反义寡脱氧核苷酸对人类白血病细胞的生长抑制”血液。

Iwase R et al.: "Fluorescent-labeled oligonucleotides for studies on gene structure" Nucleic Acids Symposium Series. (印刷中). (1996)

Iwase R 等人：“用于基因结构研究的荧光标记寡核苷酸”核酸研讨会系列（正在出版）。

村上 章 他: "高分子化学と核酸の機能デザイン" 高分子学会バイオ・高分子研究会編、学会出版センター, 分担執筆p27-51 (1996)

Akira Murakami 等：“Polymer Chemistry and Function Design of Nucleic Acids”，日本高分子学会 Bio/Polymer 研究小组编辑，学会出版中心，合著者 p27-51 (1996)

Hirakawa K et al.: "Primary acute myeloid leukemia cells negative for c-kit receptur protein expression do not proliferate in vitro……." Leukemia. 10. 279-287 (1996)

Hirakawa K 等人：“c-kit 受体蛋白表达阴性的原发性急性髓性白血病细胞在体外不会增殖......”白血病。 10. 279-287 (1996)