がんの遺伝子治療に向けた超機能性人工オリゴヌクレオチドの創製

创造用于癌症基因治疗的超功能人工寡核苷酸

基本信息

批准号：
15025239
负责人：
今西武
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、天然ヌクレオシドの糖部を架橋構造化することでN型或いはS型と呼ばれる立体配座に固定した新しい人工核酸(Bridged Nucleic Acid:BNA)の開発を進め、これら人工核酸をオリゴヌクレオチド中に導入することで、そのアンチセンス効果が飛躍的に向上することを見いだしてきた。ここでは、細胞のアポトーシス死に関する遺伝子として知られるbcl-xLおよび原ガン遺伝子として知られるc-mycに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドに2',4'-BNAを導入しその評価解析を行った。その結果、bcl-xLを標的とした2'、4'-BNA修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド(BNA-oligo)は、培養細胞系においてbcl-xLのmRNAレベルを大幅に低下させ、細胞をアポトーシスへと導いた。その効果は配列特異的であった。これに対し同配列のホスホロチオアートオリゴヌクレオチド(S-oligo)はbcl-xL以外にも多くの遺伝子のmRNAレベルを低下させた。一方、これまで天然オリゴヌクレオチド(D-oligo)による細胞増殖抑制効果が認められていたc-mycに対するアンチセンス配列を用い、S-oligo、D-oligo及びBNA-oligoの効果を評価したところ、S-oligoでは配列非特異的な効果を示した。また、D-oligoは強い細胞増殖抑制を示した。これに対し、意外にもBNA-oligoは増殖抑制を全く示さなかった。この結果を詳細に解析したところ、c-mycを標的とした場合のD-oligoによる細胞増殖抑制効果が、配列中に含まれる、CpGモチーフに由来するものであることが強く示唆された。このことより、BNA-oligoではCpGモチーフによる細胞増殖阻害を回避できることが明らかとなった。

我们正在开发新的人工核酸（BNA），其中天然核苷的糖部分通过交联固定在称为N型或S型的构象中，并且我们正在将这些人工核酸整合到寡核苷酸中。发现将其引入可显着提高反义效应在这里，我们将 2',4'-BNA 引入到 bcl-xL（被称为与细胞凋亡相关的基因）和 c-myc（被称为原癌基因）的反义寡核苷酸中，并对它们进行了评估和分析。结果。结果，靶向 bcl-xL 的 2',4'-BNA 修饰的反义寡核苷酸 (BNA-oligos) 显着降低了培养细胞系中 bcl-xL 的 mRNA 水平，并促进细胞凋亡。效果是特定于序列的。相反，具有相同序列的硫代磷酸寡核苷酸（S-oligo）降低了除bcl-xL之外的许多基因的mRNA水平。另一方面，我们使用针对c-myc的反义序列评估了S-oligo、D-oligo和BNA-oligo的效果，观察到了天然寡核苷酸(D-oligo)的细胞生长抑制效果。 S-oligo 显示出序列非特异性效应。此外，D-oligo 对细胞增殖表现出强烈的抑制作用。相反，令人惊讶的是，BNA-oligo 没有表现出任何生长抑制。对该结果的详细分析强烈表明，D-oligo靶向c-myc时的细胞增殖抑制作用源自该序列中包含的CpG基序。这表明BNA-oligo可以避免CpG基序引起的细胞生长抑制。