紫外線損傷塩基を含む化学合成オリゴヌクレオチドを用いたDNA修復機構の研究

使用含有紫外线损伤碱基的化学合成寡核苷酸研究DNA修复机制

• 批准号: 08280201
• 负责人: 森岡 弘志
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08280201/
• 关键词: 紫外線損傷DNA; (6-4)光産物; オリゴヌクレチオド; ファージディスプレイシステム; バイオセンサー; 1本鎖抗体; 紫外線損傷DNA; (6-4)光産物; オリゴヌクレチオド; ファージディスプレイシステム; バイオセンサー; 1本鎖抗体

本研究の代表者らは,(6-4)光産物を特異的に認識する1本鎖抗体(64M5scFv抗体)をもとに,ファージディスプレイシステムを用いて,結合能や抗原特異性の異なる新規抗体分子の作製を試みた.以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.(1)64M5scFv抗体遺伝子へのランダム変異導入法はMn^<2+>を用いたPCRを選択した.変異型64M5scFv抗体を分子表面に提示したファージライブラリーを調製した後,バイオパニングによるアフィニティセレクションを行った.(2)バイオパニングおよび結合活性の測定の際に抗原となる(6-4)光産物あるいはDewar型異性体等の光損傷を含むオリゴヌクレオチド(d8mer,d(CAAT[]TAAG):T[]T部位は(6-4)光産物あるいはDewar型異性体等の光損傷)は,化学合成し紫外線照射後,高速液体クロマトグラフィーで分離,精製して得られた.(3)得られたscFv抗体の評価にはバイオセンサーシステム(BIAcore)を用い,反応速度論的な解析を行うことを計画した.まず,天然型の64M5Fabおよび64M5scFvと(6-4)光産物を含むオリゴヌクレオチドとの相互作用の解析を行い,それぞれのkassおよびkdissを測定し解離定数Kdを求めたところ,(6-4)光産物を含むd8merに対する64M5scFvのKd値(4.5±0.8x10^<-10>)は64M5FabのKd値(1.5±0.2x10^<-10>)とほぼ等しいことが分かった.すなわち,この解析,評価法は抗体分子の改変を進めていく上で有効であることが確認された.(4)現在,(6-4)光産物あるいはDewar型異性体を含むオリゴヌクレオチドを抗原として,バイオパニングを繰り返し行っている.

这项研究的代表试图使用基于单链抗体（64M5SCFV抗体）的噬菌体显示系统来创建具有不同结合能力和抗原特异性的新型抗体分子，该抗体分子专门识别了光多生殖器。下面我们介绍了今年获得的新发现的结果。 （1）使用Mn^<2+>选择了将随机诱变引入64M5SCFV抗体基因的方法。突变体64M5SCFV抗体呈现在分子表面上。准备噬菌体库后，通过Biopanning进行亲和力选择。 （2）寡核苷酸（D8Mer，D（Caat [] taag）含有光损伤受到光损伤的光损伤，光损伤的光损伤受光损伤的光损伤的光损伤受光症的光损伤光损伤的光照相照相照相照相照相照相照相光体光体光体光体光体光体光体光体光体光体光体光照体子体光体光米体光照相光照体子体光体光米体光光体光米体光光亚光光配配配配光光配配配配光光光配配配米传体光光体光光配配配光光配配配配光光配配配配米相子体子体子体配米体子光体子体子体体体体体体体体体体体体照体光米子光子外酒外服验子光子受损伤受到光损伤受到光损伤的光症的光损伤受到光损伤的光子受损伤受到光损伤的光损伤的光损伤的光子损伤受到光损伤受到光损伤的光损伤的光损伤的光损伤受光损伤的光损伤的光损伤光症的光症照相仪的光症照相仪的光照相照相的光照相amagiagaigagamage opodagagagagagagamage opapamage opodagagagagagaimage obyagage opapamage opodagagagagagaimage opagamage opodabage opodagagagagagage光子受损伤受到光损伤受到光损伤的光症的光损伤受到光损伤的光子受损伤受到光损伤的光损伤的光损伤的光子损伤受到光损伤受到光损伤的光损伤的光损伤的光损伤受光损伤的光损伤的光损伤光症的光症照相仪的光症照相仪的光照相照相的光照相amagiagaigagamage opodagagagagagagamage opapamage opodagagagagagaimage obyagage opapamage opodagagagagagaimage opagamage opodabage opodagagagagagage光子受损伤受到光损伤受到光损伤的光症的光损伤受到光损伤的光子受损伤受到光损伤的光损伤的光损伤的光子损伤受到光损伤受到光损伤的光损伤的光损伤的光损伤受光损伤的光损伤的光损伤光症的光症照相仪的光症照相仪的光照相照相的光照相amagiagaigagamage opodagagagagagagamage opapamage opodagagagagagaimage obyagage opapamage opodagagagagagaimage opagamage opodabage opodagagagagagage光损伤光损伤的光损伤光损伤光损伤光损伤的光损伤通过图表分离和纯化获得了结果。 （3）计划对所获得的SCFV抗体进行评估，以使用生物传感器系统（BIACORE）进行动力学分析。首先，分析了天然64M5FAB和64M5SCFV和含有（6-4）光产物的寡核苷酸之间的相互作用，并确定离解常数KD。测量每个KAS和KDIS，并确定离解常数KD。发现MER的64M5SCFV（4.5±0.8x10^<-10>）的KD值大约等于64M5FAB的KD值（1.5±0.2x10^<-10>）。换句话说，这种分析和评估方法已被证实在抗体分子的开发中有效。 （4）目前，（6-4）生物固定是使用含有露型异构体作为抗原的光药物或寡核苷酸反复进行的。