増殖細胞核抗原(PCNA)が関与するDNA修復の分子機構の解析

增殖细胞核抗原（PCNA）DNA修复的分子机制分析

基本信息

批准号：
09771959
负责人：
森岡弘志
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771959/
关键词：
増殖細胞核抗原 PCNA DNA修復 FEN-1 部位特異的変異 GADD45

项目摘要

PCNAは,真核細胞のDNA複製に関与するDNAポリメラーゼδ(polδ)のprocessive DNA合成に必須の補助因子であり,複製因子C(RFC)のDNA依存性ATPase活性を促進することが知られている.また,紫外線照射により損傷を受けたプラスミドを鋳型とした無細胞ヌクレオチド除去修復系による実験から,ヌクレオチド除去修復因子の1つとしても示唆されている.さらに,サイクリン依存性キナーゼの阻害因子であるp21やGADD45,DNA複製および修復の両方に関与するFEN-1等に結合することが報告される等,PCNAはDNA上で起こる各種反応の制御機構に重要な役割を果たしていると考えられている.本研究の代表者は,PCNAが関与するDNA修復の分子機構の解明を目的として,組換え型ヒトPCNA変換体を用いて,特にFEN-1との相互作用の解析を行っている.以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.PCNAの21番目のアスパラギン酸をアラニンに変換した変異体ではRF-cの.ATPase活性促進およびPolδのDNA鎖伸長反応促進は野生型PCNAと同様であったがFEN-1のエンドヌクレアーゼ活性促進は野生型PCNAに対し20〜40%まで低下していた.そこで,21番目のアスパラギン酸をグルタミン酸(D21E)またはアスパラギン(D21N)に変換した変異体を作製し,FEN-1のエンドヌクレアーゼ活性促進能を調べたところ,D21Eでは野生型と同等の活性促進能を示したが,D21Nでは野生型の10〜30%しか活性促進能がみられなかった.以上のことから,FEN-1のエンドヌクレアー活性促進にはPCNAの21番目のアスパラギン酸の負電荷が重要と考えられた.

PCNA 是 DNA 聚合酶 δ (polδ) 的一种持续酶，参与真核细胞中的 DNA 复制。它是 DNA 合成的重要辅助因子，已知可促进复制因子 C (RFC) 的 DNA 依赖性 ATP 酶活性。还已知它可使用因紫外线照射而受损的质粒作为模板来促进无细胞核苷酸去除。使用修复系统表明它也是核苷酸切除修复因子。此外，还表明它是核苷酸切除修复因子。此外，p21、GADD45和D据报道，PCNA与FEN-1结合，参与NA复制和修复，并被认为在DNA上发生的各种反应的控制机制中发挥重要作用，其代表是使用重组人PCNA转化体。分析与FEN-1的相互作用，旨在阐明涉及PCNA的DNA修复的分子机制。在PCNA的第21位天冬氨酸转变为丙氨酸的突变体中，RF-c ATPase活性的促进和PolδDNA链延伸反应的促进与野生型PCNA相似，但是FEN的核酸内切酶活性的促进。与野生型PCNA相比，-1减少至20-40%。或者，我们创建了一个转化为天冬酰胺（D21N）的突变体，并检查了其促进 FEN-1 核酸内切酶活性的能力。D21E 显示出与野生型相同的促进活性的能力，但 D21N 显示出相同的促进 FEN 的能力-1核酸内切酶活性。促进FEN-1活性的能力仅为野生型的10%至30% 由此可见，PCNA中第21位天冬氨酸的负电荷对于促进FEN-1的核酸内切活性具有重要作用。 1..