ヒト増殖細胞核抗原(PCNA)変換体を用いるDNA複製機構の解析

使用人增殖细胞核抗原 (PCNA) 转化体分析 DNA 复制机制

基本信息

批准号：
08277201
负责人：
森岡弘志
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277201/
关键词：
増殖細胞核抗原 PCNA RFC DNAポリメラーゼS FEN-1

项目摘要

ヒトPCNAの構造機能相関を探索することを目的として,ヒトPCNA変換体と複製因子C(RFC),DNAポリメラーゼδ(polδ)およびフラップエンドヌクレアーゼ(FEN-1)との相互作用を調べた.以下に,今年度得られた新たな知見等の成果を示す.(1)ヒトPCNAの分子表面に突出する8ケ所のループ領域に出芽酵母の相当する位置のアミノ酸配列を導入したヒト-出芽酵母キメラPCNAを調製し,RFCおよびpolδとの相互作用を解析した.その結果,PCNA単分子中の2つのドメイン間をつないで安定な構造を形成する役割を果たすinterdomain connecting loop領域(118-134番の17アミノ酸残基)がpolδとの相互作用に関与していることが分かった.また,41-45番の5アミノ酸残基からなるグループ領域がRFCとの結合に関与していることが示された.(2)ヒトPCNA部位特異的変換体およびキメラPCNAによるFEN-1のヌクレアーゼ活性の促進効果を5′flap DNAを基質として調べた.その結果,PCNAのリング構造内側の塩基性アミノ酸をアラニンに置換した変換体ではエンドヌクレアーゼ活性の促進効果が低下した.これら一群のアミノ酸は,DNA clampingに機能することから,PCNAとDNAとの相互作用がFEN-1の活性に重要であると考えられた.また,分子表面に存在する21,41,122番目のアスパラギン酸をアラニンに置換した変換体およびinterdomain connecting loop領域を出芽酵母の配列に置換したキメラPCNAでFEN-1のエンドヌクレアーゼ活性の促進効果が低下した.すなわち,これらの領域がFEN-1との相互作用に重要であることが分かった.

为了探索人PCNA的结构功能相关性，人PCNA转化率与重复因子C（RFC），DNA聚合酶δ（POLδ）和瓣末端护士（FEN-1）之间的相互作用（fen-1）。新知识（1）在八个循环区域中引入了氨基酸序列，域间连接环区域（118-134数字（118-134号118-134号（118-134 17），发现氨基酸残基与POLδ相互作用。还表明了由组成的组面积5氨基酸残基41-45与RFC结合（2）人PCNA位点，FEN-1的FEN-1的特殊转化是通过5'Flap DNA在Fen-1 PCNA中检查的。促进末端真空活性的影响降低了DNA夹具的功能，因此PCNA和DNA之间的相互作用对于Fen-1活性很重要。是一种嵌合体PCNA，由21,41,122的天质酸在分子表面上的转化，并带有丙氨酸，并以酸味酵母降临。与Fen-1的相互作用。