心筋細胞の発生分化における核内がん遺伝子産物の役割

核癌基因产物在心肌细胞发育和分化中的作用

基本信息

批准号：
08258226
负责人：
石井俊輔
金额：
$ 0.96万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08258226/
关键词：
心筋細胞細胞増殖 Myb Ski Sno 転写制御コアクティベータ-シグナル伝達

项目摘要

Mybは従来未分化造血系細胞の増殖の制御に関与する転写因子と考えられてきた。しかし最近血液系以外の細胞でも発現していることが見出され、mitogen刺激による血管平滑筋細胞の増殖にはMybが機能していることが示されている。私達はMyb過剰発現トランスジェニックマウスでは心筋細胞のサイズが増大し、心肥大の症状を呈することをすでに報告した。しかし、c-myb遺伝子の完全欠損マウスは造血不全のため胎児13日目の段階で致死となり、心筋細胞の発生分化におけるMybの役割を解析できない。そこで、二段階相同組み換えを用いて、MybのDNA結合ドメインやインヒビター結合ドメイン内に点変異を導入した変異マウスの作製を試みた。これらのマウスではMyb活性が野生型の1/10または10倍になり、発展途上で致死とならず、心筋細胞等の増殖制御におけるMybの役割を検討できることが期待される。これまでにヘテロマウスを得ることができ、現在ホモ変異マウスを作製する目処をつけることができた。またMybの転写活性化に必要なコアクティベータ-を解析した結果、CBPがMybのコアクティベータ-として機能することが示された。CBPはCREB以外にもJum,Fos,MyoD,Stat2,核内受容体などのコアクティベータ-として機能することが最近明らかにされた。一連の解析の結果、CBPを取り合うことによりMyb活性がこれらの転写因子により阻害されることが示された。また私達は最近Mybに結合する制御因子をcDNAクローニングにより同定したが、この因子がCBPにも結合することを見い出した。したがって、この因子はMybとCBPの結合を制御することが推定された。一方別の核内がん遺伝子産物Skiおよびその関連遺伝子産物Snoは筋細胞の分化に関与することが培養細胞を用いた研究結果により示唆されている。snoの生理機能を理解するため、sno遺伝子欠損マウスを作製・解析した。sno欠損ホモマウスは胎児9.5〜10.5日目で致死となり、sno遺伝子が発生に必須であることが示された。そして、ヘテロ欠損マウスは正常に生まれるが、体が小さく、そのうち約1/3は生後1週間以内に死亡した。しかし、sno変異マウスでは心臓、骨格筋などの筋組織での異常はまったく認められなかった。

Myb 传统上被认为是参与控制未分化造血细胞增殖的转录因子。然而，最近发现Myb在血液系统以外的细胞中表达，表明Myb在有丝分裂原刺激的血管平滑肌细胞的增殖中发挥作用。我们之前曾报道过Myb过度表达的转基因小鼠心肌细胞大小增加并表现出心脏肥大的症状。然而，c-myb基因完全缺陷的小鼠在胚胎第13天就会因造血衰竭而死亡，因此无法分析Myb在心肌细胞发育和分化中的作用。因此，我们尝试使用两步同源重组来产生突变小鼠，其中点突变被引入到Myb的DNA结合域和抑制剂结合域中。在这些小鼠中，Myb 活性是野生型的 1/10 或 10 倍，并且小鼠在发育过程中不会致死，这使得研究 Myb 在控制心肌细胞增殖中的作用成为可能。到目前为止，我们已经能够获得杂合子小鼠，并且我们现在有望创建纯合子突变小鼠。此外，对 Myb 转录激活所需的共激活因子的分析表明，CBP 具有 Myb 共激活因子的功能。最近发现，CBP 可以作为除 CREB 之外的其他受体的共激活剂，包括 Jum、Fos、MyoD、Stat2 和核受体。一系列分析表明，Myb 活性受到这些转录因子通过竞争 CBP 的抑制。此外，我们最近通过cDNA克隆鉴定了一个与Myb结合的调节因子，并发现该因子也与CBP结合。因此，推测该因素控制Myb和CBP的结合。另一方面，使用培养细胞的研究结果表明，另一种核癌基因产物Ski及其相关基因产物Sno参与肌肉细胞分化。为了了解sno的生理功能，我们创建并分析了sno基因缺陷小鼠。 sno 缺陷的纯合小鼠在胚胎第 9.5 至 10.5 天就会死亡，这表明 sno 基因对于发育至关重要。杂合子小鼠虽然出生正常，但体型较小，大约有三分之一在出生后一周内死亡。然而，sno突变小鼠的心脏和骨骼肌等肌肉组织没有观察到异常。