活性酸素による増殖関連遺伝子誘導の分子機構

活性氧诱导增殖相关基因的分子机制

基本信息

批准号：
07253224
负责人：
野瀬清
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子発現における活性酸素の役割を明らかにする目的で、レドックスにより発現が制御されていることが示唆されている炎症性サイトカインJE遺伝子の発現機構を検討した。JEmRNAレベルは、血清、TPA、TNFα、および過酸化水素など種々の刺激により、マウス胎児由来細胞Balb/c3T3において顕著に誘導された。JEmRNAの発現、特にTPAおよびTNFαによるものは、活性酸素消去剤pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC)およびtetramethylthiouria (TMTU)により著しく抑制された。また細胞内酸化状態をレドックス感受性蛍光試薬を用いて共焦点レーザー顕微鏡で調べた結果、TPAおよびTNFα処理により一過性に酸化状態が高まること、PDTCおよびTMTUによりこの上昇が完全に抑制されることが確認された。さらに、TPAおよびTNFαによるJEmRNA発現、および活性酸素消消去剤によるその抑制は、共に転写レベルの抑制であった。これらの結果は、JEmRNA発現に転写レベルのレドックス抑制の存在を示唆している。そこで、レドックス抑制に関連するエレメントを解析する目的でJE遺伝子の5'上流2600bpを用いて、種々のCAT発現系を作製して検討した。その結果、当初予想していたプロモーター領域近傍ではなく、5'上流2000〜2500bpの間にレドックス制御エレメントの存在が示唆された。現在、この領域についてさらに詳細に検討している。

为了阐明活性氧在基因表达中的作用，我们研究了炎症细胞因子JE基因的表达机制，该基因的表达被认为受氧化还原调节。在小鼠胎儿来源的细胞 Balb/c3T3 中，血清、TPA、TNFα 和过氧化氢等各种刺激显着诱导 JE mRNA 水平。活性氧清除剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯 (PDTC) 和四甲基硫脲 (TMTU) 显着抑制 JE mRNA 表达，尤其是由 TPA 和 TNFα 诱导的表达。此外，使用共聚焦激光显微镜使用氧化还原敏感荧光试剂检查细胞内氧化态，结果发现，氧化态随着TPA和TNFα处理而短暂增加，并且这种增加被PDTC和TMTU完全抑制。被证实。此外，TPA 和 TNFα 引起的 JE mRNA 表达以及活性氧清除剂的抑制均抑制了转录水平。这些结果表明在转录水平上存在 JE mRNA 表达的氧化还原抑制。因此，为了分析与氧化还原抑制相关的元件，我们利用JE基因5'上游的2600 bp构建并研究了各种CAT表达系统。结果表明，5' 端上游 2000 至 2500 bp 之间存在氧化还原控制元件，而不是像最初预期的那样位于启动子区域附近。我们目前正在更详细地研究这一领域。